多重耐药菌检测

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多重耐药菌检测技术规范

一、检测范围

1. 目标菌种：主要包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐万古霉素肠球菌（VRE）、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肠杆菌科细菌、耐碳青霉烯类肠杆菌（CRE）、多重耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）、多重耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）等。
2. 标本类型：涵盖临床血液、尿液、痰液、伤口分泌物、脑脊液、腹腔积液等各类样本。
3. 适用场景：医院感染监测、重症监护病房（ICU）、呼吸科、外科术后感染筛查及社区感染溯源。

二、检测项目

1. 细菌培养与鉴定：通过选择性培养基分离目标菌种，结合生化反应或分子技术确认菌种。
2. 药敏试验：检测细菌对β-内酰胺类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素的敏感性。
3. 耐药基因检测：针对blaNDM、blaKPC、mecA、vanA/vanB等耐药基因进行分子筛查。
4. 表型确认试验：如ESBLs确证试验（CLSI双纸片法）、碳青霉烯酶改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）等。
5. 同源性分析：用于暴发流行时菌株溯源，如脉冲场凝胶电泳（PFGE）或全基因组测序（WGS）。

三、检测仪器

1. 自动化微生物分析系统：VITEK 2 Compact（生物梅里埃）、BD Phoenix™（BD公司）等，用于快速细菌鉴定及药敏分析。
2. 分子检测设备：实时荧光定量PCR仪（如ABI 7500）、GeneXpert®系统（检测MRSA、VRE等）。
3. 质谱仪：MALDI-TOF MS（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）实现快速菌种鉴定。
4. 测序平台：Illumina MiSeq/NovaSeq、Oxford Nanopore用于耐药基因及全基因组分析。
5. 药敏试验配套设备：微量肉汤稀释板、E试验（Epsilometer test）条及药敏纸片分配器。

四、检测方法

1. 样本处理

   • 前处理：血液标本接种血培养瓶，痰液采用胰酶消化液化，尿液离心取沉渣。
   • 选择性培养：MRSA使用含6% NaCl和苯唑西林的琼脂培养基；VRE采用含万古霉素的胆汁七叶苷培养基。

2. 细菌鉴定与药敏

   • 培养法：35℃孵育18-24小时，观察菌落形态及溶血特征。
   • 自动化鉴定：通过VITEK 2 GP/GN卡或BD Phoenix™面板分析生化反应。
   • 药敏试验：采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法或纸片扩散法（Kirby-Bauer法），判读MIC值或抑菌圈直径。

3. 分子生物学检测

   • 实时荧光PCR：设计特异性引物探针，扩增耐药基因（如mecA、blaKPC），通过Ct值判定阳性。
   • 基因测序：对耐药基因（如gyrA、parC突变）进行Sanger测序或宏基因组测序（mNGS）。

4. 表型确证试验

   • ESBLs检测：头孢噻肟/头孢噻肟+克拉维酸纸片协同试验，抑菌圈差值≥5mm为阳性。
   • mCIM试验：将待测菌与美罗培南药敏纸片共孵育，观察大肠埃希菌指示菌株抑菌圈缩小。

5. 同源性分析

   • PFGE：细菌DNA经限制性内切酶消化后电泳，比对条带模式。
   • MLST（多位点序列分型）：通过7个管家基因序列确定菌株型别。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。