信息概要
噬菌体全基因组检测标准基于微生物基因组学分析技术,涵盖基因组测序、组装、注释及功能分析等核心内容。该标准发布于2018年7月,现行版本为ISO 21748:2020,未明确废止时间,适用于科研、医疗及工业领域的噬菌体特性鉴定与质量控制。
检测项目
基因组完整性验证,GC含量测定,基因序列组装质量评估,开放阅读框(ORF)预测,tRNA与rRNA识别,启动子与终止子分析,基因功能注释,毒力因子筛查,抗性基因检测,CRISPR序列分析,噬菌体分型,溶原性判定,宿主范围测试,基因组同源性比对,插入序列(IS)识别,噬菌体结构蛋白鉴定,基因组甲基化位点检测,噬菌体复制起点定位,代谢通路重构,噬菌体生命周期相关基因分析,基因组重复序列统计,噬菌体整合酶基因筛查,毒力基因水平转移评估,噬菌体包装信号识别
检测范围
肌尾噬菌体科,长尾噬菌体科,短尾噬菌体科,微小噬菌体科,丝状噬菌体科,T4样噬菌体,λ样噬菌体,T7样噬菌体,SPO1样噬菌体,Mu样噬菌体,φ29样噬菌体,棒状噬菌体,囊状噬菌体,有尾噬菌体目,光滑噬菌体,烈性噬菌体,温和噬菌体,古菌噬菌体,海洋噬菌体,肠道噬菌体,土壤噬菌体,工业发酵噬菌体,医疗用噬菌体,广宿主谱噬菌体,窄宿主谱噬菌体
检测方法
Illumina NovaSeq 6000测序:采用双端测序技术实现高通量基因组数据获取
Oxford Nanopore MinION:通过纳米孔技术进行长片段实时测序
PacBio SMRT测序:应用单分子实时测序技术解决复杂区域组装
qPCR定量分析:精确测定特定基因拷贝数
生物信息学组装:使用SPAdes、Velvet等算法完成基因组拼接
比较基因组学分析:通过Mauve等工具实现多序列比对
蛋白质质谱鉴定:MALDI-TOF检测结构蛋白组成
Southern blot杂交:验证基因组结构重排
透射电子显微镜:观察噬菌体形态特征
宿主范围试验:多菌株平板效率测定法
溶原性诱导实验:丝裂霉素C诱导裂解验证
限制性内切酶图谱:基因组物理图谱构建
RAPD分子标记:快速基因多态性分析
宏基因组溯源分析:环境样本中噬菌体追踪
代谢组学关联检测:宿主-噬菌体互作研究
检测仪器
高通量测序仪,实时定量PCR仪,纳米孔测序装置,单分子实时测序系统,生物分析仪,微量分光光度计,脉冲场电泳系统,冷冻透射电镜,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪,超速离心机,荧光显微成像系统,核酸蛋白质分析仪,自动化液体处理工作站,恒温培养摇床,生物安全柜