细胞内活性氧检测

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检测范围

细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）的检测范围主要包括以下场景：

1. 生理及病理状态：如正常细胞代谢、氧化应激（如炎症、衰老）、疾病模型（癌症、神经退行性疾病）中的ROS水平变化。
2. 细胞类型：涵盖动物细胞（如哺乳动物细胞系、原代细胞）、植物细胞及微生物。
3. 亚细胞定位：如线粒体、内质网、细胞核等特定细胞器中ROS的生成与分布。
4. 外部刺激响应：药物处理（如化疗药物）、环境因素（紫外线、重金属）或基因编辑后细胞内ROS的动态变化。

检测项目

1. ROS种类：超氧阴离子（O₂⁻）、过氧化氢（H₂O₂）、羟基自由基（·OH）、单线态氧（¹O₂）等。
2. 总ROS水平：细胞内整体氧化还原状态的评估。
3. 时空动态：ROS的实时波动（如时间依赖性变化）及亚细胞空间分布。
4. 抗氧化系统关联指标：谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性或含量，以及脂质过氧化产物（如丙二醛，MDA）。

检测仪器

1. 荧光显微镜/激光共聚焦显微镜：用于可视化ROS的亚细胞定位及半定量分析，配合特异性探针（如MitoSOX检测线粒体O₂⁻）。
2. 流式细胞仪：高通量检测细胞群体中ROS水平，常用探针包括DCFH-DA（H₂DCFDA）。
3. 酶标仪（微孔板读数仪）：适用于批量样本的荧光或比色法检测（如NBT法测超氧化物）。
4. 电子自旋共振波谱仪（ESR）：直接捕获自由基信号，特异性高但操作复杂。
5. 化学发光仪：检测ROS相关的化学发光信号（如鲁米诺反应检测H₂O₂）。

检测方法

1. 荧光探针法
   • DCFH-DA法：细胞加载DCFH-DA（无荧光），胞内酯酶水解后生成DCFH，与ROS反应生成荧光物质DCF，通过荧光强度定量总ROS。
   • MitoSOX Red：靶向线粒体的超氧化物探针，激发后发红色荧光。
   • HyPer传感器：基因编码的荧光蛋白探针，特异性检测H₂O₂，需转染细胞表达。
2. 化学比色法
   • TBA法：通过硫代巴比妥酸（TBA）与MDA反应生成红色产物，间接评估脂质过氧化程度。
   • NBT还原法：超氧化物还原氮蓝四唑（NBT）生成蓝色甲臜，沉淀于细胞中，通过吸光度定量。
3. 电子自旋共振（ESR）：利用自旋捕捉剂（如DMPO）与自由基结合形成稳定加合物，通过ESR波谱分析自由基种类及浓度。
4. 化学发光法：鲁米诺或光泽精等发光底物与ROS反应产生光信号，通过发光值定量ROS水平。

（注：实验需设置阴性/阳性对照，并避免光照及温度干扰以保证数据准确性。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。