细胞端粒酶活性检测

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细胞端粒酶活性检测范围 端粒酶活性检测主要应用于体外培养的哺乳动物细胞、肿瘤细胞系、干细胞及原代细胞样本。检测范围涵盖正常体细胞（端粒酶活性通常阴性）、恶性肿瘤细胞（高活性表达）、生殖细胞及再生能力较强的组织细胞（如造血干细胞）。此外，该检测也可用于药物筛选研究，评估端粒酶抑制剂或激活剂的干预效果。样本类型包括细胞裂解液、冻存组织匀浆液及部分体液（如血液中的循环肿瘤细胞）。

细胞端粒酶活性检测项目

1. 端粒酶活性定量分析：通过标准曲线计算样本中端粒酶的相对活性单位（TAU）。
2. 阳性与阴性对照检测：设置端粒酶阳性细胞（如HeLa细胞）和热灭活阴性对照，确保实验特异性。
3. 抑制剂/激活剂干预效果评估：检测药物处理前后端粒酶活性的变化。
4. 端粒酶活性动态监测：针对不同细胞周期或分化阶段的活性差异分析。

细胞端粒酶活性检测仪器

1. 实时荧光定量PCR仪：用于TRAP（端粒重复扩增法）产物的扩增与定量分析。
2. 酶标仪：支持比色法（如ELISA）或荧光法检测端粒酶产物。
3. 凝胶成像系统：用于传统TRAP法电泳条带的显影与半定量分析。
4. 低温高速离心机：细胞裂解液中核蛋白的分离。
5. 细胞破碎仪：高效提取细胞内的端粒酶复合物。
6. 超低温冰箱（-80℃）：保存细胞裂解液及试剂。

细胞端粒酶活性检测方法

1. TRAP法（端粒重复扩增法）

   • 步骤： （1）制备细胞裂解液，提取端粒酶； （2）端粒酶延伸反应：加入TS引物（5&39;-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3&39;）及dNTPs，37℃孵育30分钟，合成端粒重复序列； （3）PCR扩增：加入CX引物（5&39;-CCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA-3&39;）及荧光染料（如SYBR Green），通过qPCR仪检测扩增曲线； （4）数据分析：根据Ct值或电泳条带强度计算活性。
   • 特点：灵敏度高（可检测10个细胞），需严格避免RNA酶污染。

2. 实时荧光定量TRAP（qTRAP） 结合荧光探针（如TaqMan）实时监测扩增过程，缩短检测时间（约2小时），适用于高通量筛选。

3. 比色法（ELISA-based TRAP） 使用生物素标记引物，通过链霉亲和素-HRP系统显色，OD450nm读数定量，操作简便但灵敏度较低。

4. 荧光底物法 采用端粒酶特异性荧光底物（如TS Primer-FAM），直接检测延伸产物的荧光信号，无需PCR扩增，适用于单细胞分析。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。