阿霉素细胞毒性检测

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阿霉素细胞毒性检测范围 阿霉素（Doxorubicin）的细胞毒性检测主要应用于抗肿瘤药物筛选、药效评价及安全性研究。检测范围涵盖体外培养的多种哺乳动物细胞系，包括但不限于人源肿瘤细胞（如MCF-7乳腺癌细胞、A549肺癌细胞、HeLa宫颈癌细胞）、正常细胞系（如HEK293人胚肾细胞）以及原代细胞。实验通常设置不同浓度梯度（如0.1-100 μM）的阿霉素处理，处理时间范围为6-72小时，以评估其对细胞增殖、存活及功能的影响。

阿霉素细胞毒性检测项目

1. 细胞存活率测定：通过检测代谢活性或膜完整性评估药物对细胞存活的影响。
2. 半数抑制浓度（IC50）：确定阿霉素抑制50%细胞活性的药物浓度。
3. 细胞凋亡与坏死分析：量化凋亡细胞（早期与晚期）及坏死细胞的比例。
4. 细胞周期分布：检测药物对细胞周期（G0/G1、S、G2/M期）的阻滞作用。
5. 线粒体功能相关指标：包括线粒体膜电位变化、活性氧（ROS）水平及ATP生成量。
6. 细胞膜完整性：通过乳酸脱氢酶（LDH）释放量评估细胞膜损伤程度。

阿霉素细胞毒性检测仪器

1. 酶标仪（如BioTek Synergy H1）：用于吸光度（MTT法、CCK-8法）或荧光信号（Calcein-AM/PI染色）检测。
2. 流式细胞仪（如BD FACSCalibur）：分析细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI双染）、细胞周期（PI染色）及ROS水平（DCFH-DA探针）。
3. 倒置荧光显微镜（如Olympus IX73）：观察细胞形态变化及荧光标记结果（如Hoechst 33342染色）。
4. 细胞培养设备：CO₂培养箱、生物安全柜及离心机（细胞传代与样本制备）。
5. 分光光度计：定量检测LDH释放实验中的比色信号（波长490 nm）。

阿霉素细胞毒性检测方法

1. MTT法
   • 步骤：将细胞接种于96孔板，培养24小时后加入阿霉素，继续培养24-48小时。加入MTT溶液（终浓度0.5 mg/mL），孵育4小时，溶解甲瓒晶体后测定570 nm吸光度，计算细胞存活率。
2. 流式细胞术检测凋亡
   • 步骤：收集药物处理的细胞，Annexin V-FITC/PI双染15分钟，流式细胞仪区分活细胞（双阴性）、早期凋亡（Annexin V+）、晚期凋亡（Annexin V+/PI+）及坏死细胞（PI+）。
3. LDH释放实验
   • 步骤：取细胞培养上清，加入LDH检测试剂，避光孵育30分钟，测定490 nm吸光度。LDH释放率=（实验组−对照组）/（最大酶活组−对照组）×100%。
4. 细胞周期分析
   • 步骤：70%乙醇固定细胞，RNase A消化RNA，PI染色DNA，流式细胞仪检测各周期细胞比例（ModFit软件分析）。
5. 线粒体膜电位检测（JC-1染色）
   • 步骤：JC-1染料孵育细胞20分钟，荧光显微镜下观察红（正常膜电位）/绿（膜电位下降）荧光比值，流式细胞仪定量分析。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。