小鼠睾丸染色体畸变检测

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检测范围

本实验以健康成年雄性小鼠（品系：ICR，周龄：810周，体重：2832 g）为研究对象，每组样本量为8~10只，共设4组（空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组）。检测范围涵盖小鼠睾丸生殖细胞在化学毒物或辐射暴露后的染色体畸变情况，包括精原细胞和减数分裂阶段的初级精母细胞。实验重复3次以确保数据可靠性。

检测项目

1. 染色体数目异常：非整倍体、多倍体细胞比例。
2. 染色体结构畸变：断裂、缺失、易位、环状染色体、无着丝粒断片。
3. 减数分裂特异性异常：联会复合体异常（如单价体、多价体）、交叉频率变化。
4. 微核发生率：生殖细胞微核形成情况。

检测仪器

1. 光学显微镜（Olympus BX53）：配备100×油镜，用于染色体形态观察和畸变计数。
2. 离心机（Eppendorf 5430R）：转速范围300~15,000 rpm，用于细胞悬液制备。
3. 显微成像系统（Nikon DS-Ri2）：高分辨率摄像头及NIS-Elements软件，用于图像采集与分析。
4. 流式细胞仪（BD FACSCalibur）：辅助筛选特定分裂期细胞。
5. 恒温水浴箱：用于低渗处理（37℃±0.5℃）。

检测方法

1. 样本采集与处理

   • 处死小鼠后取双侧睾丸，剥离被膜并剪碎，加入0.075 M KCl低渗液（37℃孵育25分钟）。
   • 固定：甲醇-冰醋酸（3:1）混合液预固定2次，每次15分钟。

2. 染色体标本制备

   • 细胞悬液滴片后经Giemsa染色（10%，pH 6.8磷酸缓冲液，染色10分钟）。
   • 空气干燥后镜检，每组分析至少100个分散良好的中期相细胞。

3. 畸变观察与统计

   • 油镜下盲法计数结构畸变及数目异常细胞，按《OECD 483指南》分类记录。
   • 微核检测采用早晚期精细胞微核计数法，每只小鼠观察1,000个细胞。

4. 数据分析

   • 使用SPSS 26.0进行卡方检验或单因素方差分析（ANOVA），显著性水平设为p<0.05。
   • 质量控制：双人独立观察，变异系数（CV）<15%视为结果可信。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。