信息概要
集落形成细胞毒性检测标准（ISO 10993-5:2018）是用于评估材料或化学物质对哺乳动物细胞集落形成能力的毒性影响的国际通用方法，发布于2018年，目前仍为有效标准。该检测通过体外细胞培养模型，分析样品对细胞增殖、存活及克隆形成能力的抑制作用，适用于医疗器械、生物材料、药品及化妆品等产品的生物相容性评价。
检测项目
细胞存活率，集落形成效率，细胞增殖抑制率，半数抑制浓度（IC50），细胞周期分布，凋亡细胞比例，坏死细胞比例，DNA损伤程度，线粒体膜电位变化，活性氧（ROS）水平，乳酸脱氢酶（LDH）释放量，细胞形态学变化，细胞贴壁能力，细胞迁移能力，细胞代谢活性（ATP含量），细胞膜完整性，基因表达谱分析，细胞色素C释放量，细胞克隆直径分布，集落形态均匀性
检测范围
医用植入材料，外科缝合线，药物缓释载体，牙科填充材料，人工关节涂层，心血管支架，注射用医疗器械，体外诊断试剂，细胞培养基质，抗癌药物，抗生素制剂，纳米材料，化妆品原料，疫苗佐剂，基因治疗载体，农药残留，工业化学品，生物降解材料，组织工程支架，医用粘合剂
检测方法
MTT比色法：通过四唑盐还原反应定量活细胞代谢活性
克隆形成试验：计数50个细胞以上形成的细胞集落数量
荧光染色法：使用Hoechst/PI双染区分活细胞与死细胞
流式细胞术：分析细胞周期分布及凋亡/坏死比例
彗星电泳：检测单细胞水平DNA损伤程度
RTCA实时细胞分析：动态监测细胞增殖曲线
Western Blot：检测凋亡相关蛋白表达水平
荧光显微镜观察：定量分析集落形态学特征
LDH释放检测：评估细胞膜完整性损伤
ATP生物发光法：精确测定细胞能量代谢状态
qPCR技术：分析毒性相关基因表达变化
细胞划痕实验：评价细胞迁移修复能力
透射电镜观察：超微结构水平毒性效应分析
微核试验：检测染色体完整性损伤
ROS荧光探针法：定量活性氧自由基生成水平
检测仪器
倒置荧光显微镜，流式细胞仪，酶标仪，细胞培养箱，生物安全柜，离心机，超微量分光光度计，实时细胞分析系统，凝胶电泳成像系统，激光共聚焦显微镜，荧光酶标仪，二氧化碳培养箱，超低温冰箱，PCR扩增仪，超纯水系统
