集落形成细胞毒性检测

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检测范围

集落形成细胞毒性检测（Colony Formation Assay）主要用于评估化学物质、药物、辐射或其他处理因素对细胞增殖能力和存活率的抑制作用。该检测广泛应用于肿瘤学研究、抗癌药物筛选、环境毒理学评估、化妆品安全性测试以及放射生物学研究。检测对象通常为贴壁生长的细胞系（如肿瘤细胞、干细胞或原代细胞），适用于体外模型中对细胞群体长期存活能力的定量分析。

检测项目

1. 细胞存活率：通过计数形成的集落数量，反映处理因素对细胞增殖能力的抑制程度。
2. 集落形成效率（CFE, Colony Forming Efficiency）：计算未处理组中形成集落的细胞占总接种细胞的百分比，用于评估细胞本身的增殖潜力。
3. 半数抑制浓度（IC50）：测定使细胞集落形成减少50%时的药物或化合物浓度。
4. 剂量-效应关系：分析不同浓度处理因素对集落形成的动态影响，绘制剂量-效应曲线。
5. 细胞周期与凋亡关联分析：结合其他检测（如流式细胞术），探究毒性作用机制是否涉及细胞周期阻滞或凋亡途径。

检测仪器

1. 细胞培养箱：提供恒温（37℃）、湿度及5% CO₂环境，维持细胞正常生长。
2. 倒置显微镜：观察集落形态、密度及染色后细胞状态。
3. 自动细胞计数器：精确计数初始接种细胞数量及集落形成数量。
4. 酶标仪或成像分析系统：配合结晶紫或台盼蓝染色，定量分析集落面积或吸光度值。
5. 流式细胞仪（可选）：辅助分析细胞周期分布或凋亡率。

检测方法

1. 细胞接种与处理

   • 选择对数生长期的细胞，胰酶消化后制备单细胞悬液，调整密度为50-1000个/孔（依据细胞类型调整），接种于6孔板或多孔板。
   • 待细胞贴壁后（通常24小时），加入待测药物、化合物或暴露于辐射等处理因素，设置不同浓度梯度及空白对照组。

2. 集落培养与固定

   • 处理结束后，更换新鲜培养基继续培养7-14天，直至对照组形成肉眼可见的集落（>50个细胞/集落）。
   • 弃培养基，PBS轻柔洗涤，甲醇或4%多聚甲醛固定细胞10-15分钟。

3. 染色与定量分析

   • 使用0.1%结晶紫或0.05%台盼蓝染色30分钟，蒸馏水冲洗去除浮色，室温干燥。
   • 通过手动计数（显微镜）或自动化软件（如ImageJ、CellProfiler）分析集落数量及面积，计算存活率或抑制率。

4. 数据分析

   • 存活率公式：存活率（%）=（处理组集落数 / 对照组集落数）×100%。
   • 使用GraphPad Prism或SPSS拟合剂量-效应曲线，计算IC50值及统计学差异（如t检验或ANOVA）。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。