药物对细胞的毒性检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围 药物对细胞的毒性检测主要覆盖以下范围：

1. 药物类型：包括小分子化学药物、生物制剂（如抗体药物）、天然产物提取物及纳米药物等。
2. 细胞类型：涵盖肿瘤细胞系（如HeLa、MCF-7）、原代细胞（如肝细胞、心肌细胞）、干细胞及免疫细胞等。
3. 浓度范围：药物浓度梯度通常设置为0.1 nM至100 μM，以评估剂量依赖性毒性。
4. 时间范围：暴露时间从短期（24小时）至长期（72小时），分析急性与慢性毒性效应。

检测项目

1. 细胞存活率：通过MTT法、CCK-8法或台盼蓝染色定量活细胞比例。
2. 细胞膜完整性：检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量，评估细胞膜损伤程度。
3. 细胞凋亡与坏死：通过Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术区分凋亡与坏死细胞。
4. 细胞周期分析：利用PI染色检测DNA含量，分析药物对细胞周期的影响（如G1期阻滞）。
5. 氧化应激指标：测定活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平。
6. 细胞代谢活性：通过ATP含量检测或葡萄糖消耗实验评估能量代谢变化。

检测仪器

1. 酶标仪（如BioTek Synergy H1）：用于MTT、CCK-8及LDH的吸光度检测。
2. 流式细胞仪（如BD FACSCelesta）：分析细胞凋亡、周期及ROS水平。
3. 荧光显微镜（如Olympus IX83）：观察细胞形态变化及荧光标记结果。
4. 高效液相色谱（HPLC）：定量药物代谢产物及毒性相关分子（如谷胱甘肽）。
5. 细胞培养箱（如Thermo Scientific HERAcell 150i）：维持恒温（37℃）、湿度（95%）及CO₂浓度（5%）环境。
6. 离心机与分光光度计：用于样品前处理及比色法检测（如MDA、SOD）。

检测方法

1. 细胞培养与药物处理：

   • 将细胞接种于96孔板（密度1×10⁴/孔），培养24小时后加入不同浓度药物。
   • 设置空白对照组（不含细胞）、阴性对照组（不含药物）及阳性对照组（含已知毒性药物）。

2. 细胞存活率检测（以MTT法为例）：

   • 药物处理结束后，每孔加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL），孵育4小时。
   • 吸弃培养基，加入100 μL DMSO溶解甲瓒结晶，震荡10分钟后测定570 nm吸光度。

3. LDH释放检测：

   • 收集细胞培养上清液，离心（1000 rpm，5分钟）去除细胞碎片。
   • 按试剂盒说明书混合上清液与LDH检测工作液，孵育30分钟后测定490 nm吸光度。

4. 流式细胞术分析凋亡：

   • 收集细胞，PBS洗涤后重悬于Binding Buffer。
   • 加入Annexin V-FITC（5 μL）和PI（5 μL），避光孵育15分钟。
   • 上机检测，通过FSC/SSC散点图圈定细胞群，分析凋亡比例。

5. 氧化应激指标检测（以MDA为例）：

   • 裂解细胞后离心取上清，加入硫代巴比妥酸（TBA）溶液，沸水浴15分钟。
   • 冷却后测定532 nm吸光度，根据标准曲线计算MDA浓度。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。