细胞融合检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

细胞融合检测技术规范

一、检测范围 细胞融合检测主要应用于以下领域：

1. 生物医学研究：包括杂交瘤技术（如单克隆抗体制备）、干细胞融合实验、肿瘤细胞与免疫细胞相互作用分析等。
2. 药物研发：评估病毒介导的细胞融合（如HIV感染机制研究）或疫苗开发（如灭活病毒诱导的细胞融合）。
3. 工业生物技术：监测微生物或哺乳动物细胞在发酵或大规模培养中的自发融合现象，例如酵母原生质体融合。

二、检测项目

1. 细胞融合效率：定量分析融合细胞占总细胞群的比例。
2. 融合细胞存活率：评估融合后细胞的活性及增殖能力。
3. 膜完整性检测：确认融合过程中细胞膜损伤程度。
4. 基因表达验证：检测融合细胞中特定标记基因（如荧光报告基因）的表达一致性。
5. 功能特性评估：包括融合细胞的代谢活性、分泌功能（如抗体产量）及信号传导能力。

三、检测仪器

1. 流式细胞仪：用于快速定量分析融合细胞表面标记物（如双荧光标记法）。
2. 荧光显微镜/共聚焦显微镜：观察细胞膜融合过程及定位融合位点（如采用DiI/DiO染料）。
3. 倒置显微镜：实时监测细胞形态变化及融合动态。
4. 酶标仪：检测融合细胞的代谢活性（如CCK-8法）或膜完整性（LDH释放试验）。
5. PCR/Western blot系统：验证融合细胞的基因型或蛋白表达特征。

四、检测方法

1. 样本制备

   • 采用聚乙二醇（PEG）、灭活病毒（如仙台病毒）或电融合法诱导细胞融合。
   • 使用荧光染料（如CFSE/PKH26）分别标记待融合的两类细胞，便于后续区分。

2. 融合效率检测

   • 双荧光标记法：通过流式细胞仪统计同时携带两种荧光信号的细胞比例。
   • 显微计数法：在倒置显微镜下随机选取视野，人工计数含双核或多核的融合细胞。

3. 存活率评估

   • 台盼蓝染色法：计算未被染色的活细胞占比。
   • CCK-8检测：通过吸光度值（450 nm）量化细胞代谢活性。

4. 膜完整性分析

   • LDH释放试验：检测细胞质乳酸脱氢酶泄漏量，评估膜损伤程度。
   • 钙离子探针检测：使用Fluo-4 AM探针标记，实时监测膜通透性变化。

5. 基因与功能验证

   • PCR扩增：针对两亲本细胞的特异性基因（如不同物种的线粒体DNA）进行扩增，确认融合细胞的基因共存性。
   • 功能测试：如杂交瘤细胞需通过ELISA验证抗体分泌能力，干细胞融合后需检测多向分化潜能。

6. 数据标准化

   • 融合效率计算公式：融合细胞数 /（亲本细胞A数 + 亲本细胞B数）×100%。
   • 结果需重复3次实验，取平均值±标准差，并通过统计学软件（如GraphPad Prism）进行显著性分析。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。