细胞侵袭检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

细胞侵袭检测技术概述

1. 检测范围 细胞侵袭检测广泛应用于肿瘤生物学、药物筛选、干细胞研究及免疫学领域，主要用于评估细胞在模拟体内微环境条件下的侵袭能力。该检测适用于多种细胞类型，包括但不限于癌细胞（如乳腺癌细胞系MDA-MB-231、肺癌细胞系A549）、免疫细胞（如T细胞、巨噬细胞）以及经过基因编辑或药物处理的细胞模型。此外，该技术还可用于研究细胞外基质（ECM）降解、细胞迁移机制及潜在抗转移药物的疗效评价。

2. 检测项目 细胞侵袭检测的核心项目包括：

• 侵袭能力：量化细胞穿透基质胶和Transwell膜的能力，反映其侵袭潜能；
• 迁移速率：通过无基质胶的Transwell实验区分单纯迁移与侵袭行为；
• 基质降解活性：检测细胞分泌蛋白酶（如MMP-2/9）对ECM成分的降解效率；
• 细胞活性关联分析：结合CCK-8或Calcein-AM染色，排除细胞增殖或死亡对侵袭结果的干扰。

3. 检测仪器 检测过程涉及以下关键仪器与设备：

• Transwell侵袭系统：包含聚碳酸酯膜（孔径8 μm）及可拆卸培养小室（如Corning品牌）；
• 共聚焦显微镜或倒置光学显微镜：用于观察和拍摄侵袭至膜下表面的细胞（如Olympus IX83、Zeiss LSM 900）；
• 酶标仪：用于比色法（如结晶紫染色后乙酸溶解）定量分析侵袭细胞数；
• 细胞培养配套设备：包括CO2培养箱、离心机、超净工作台及移液系统；
• 图像分析软件：如ImageJ、MetaMorph，用于自动计数及统计侵袭细胞面积占比。

4. 检测方法 步骤一：基质胶包被 将Transwell小室置于24孔板中，于4℃条件下以50 μL Matrigel（1:8稀释于无血清培养基）均匀覆盖聚碳酸酯膜上表面，37℃孵育2小时形成凝胶层。

步骤二：细胞接种与诱导 消化对数生长期细胞，调整浓度至1×10^5 cells/mL，取200 μL悬液加入Transwell上室，下室加入500 μL含10% FBS或特定趋化因子（如EGF）的培养基，37℃、5% CO2条件下培养18-48小时（依细胞类型调整）。

步骤三：固定与染色 移除小室，PBS轻柔清洗未侵袭细胞，4%多聚甲醛固定30分钟，0.1%结晶紫染色20分钟，棉签擦除膜上表面残留细胞。

步骤四：图像采集与定量 将小室置于载玻片，显微镜随机选取5个视野（200×），拍摄膜下表面侵袭细胞，通过ImageJ设定灰度阈值自动计数，计算平均侵袭细胞数或侵袭指数（实验组/对照组比值）。重复实验至少3次，数据以均值±标准差表示，采用t检验或ANOVA进行统计学差异分析。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。