细胞内钾离子检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围

细胞内钾离子检测适用于以下研究或应用场景：

1. 细胞类型：动植物细胞、微生物细胞（如细菌、真菌）、原代培养细胞及细胞系（如HEK293、HeLa）。
2. 样本来源：体外培养细胞、组织切片分离的细胞、体液中的游离细胞（如血液红细胞、脑脊液细胞）。
3. 应用领域：基础细胞生理学研究、疾病诊断（如低钾血症相关病理）、药物毒性评估（如化疗药物对细胞内钾的影响）。
4. 实验条件：正常生理状态与病理状态（如缺氧、凋亡）下的细胞，以及药物或离子通道调控剂处理后的细胞。

检测项目

1. 细胞内游离钾离子浓度：定量测定细胞质基质中K⁺的实时或稳态浓度（单位：mmol/L或mM）。
2. 跨膜钾离子梯度：分析细胞内与细胞外（如培养基或胞外液）的K⁺浓度差异及动态平衡。
3. 钾离子分布：亚细胞器水平检测，如线粒体、内质网、细胞核内的K⁺含量。
4. 钾通道活性评估：通过浓度变化间接反映钾离子通道（如Kv、KATP）的功能状态。
5. 关联参数：钠钾比（Na⁺/K⁺）、细胞膜电位变化、细胞体积调节（与K⁺外流相关）。

检测仪器

1. 原子吸收光谱仪（AAS）：用于高精度定量总钾含量，需结合细胞裂解液分析。
2. 电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）：超痕量检测，可同时分析多种离子，灵敏度达ppb级。
3. 荧光显微镜/共聚焦显微镜：搭载钾离子荧光探针（如PBFI、Asante Potassium Green），实现活细胞实时成像。
4. 离子选择性微电极：直接穿刺细胞膜，测量单细胞内K⁺浓度，分辨率达微米级。
5. 流式细胞仪：结合膜渗透性荧光染料（如Fluo-4FF），高通量分析细胞群体内K⁺水平。
6. 火焰光度计：传统方法，适用于血清或裂解液中的钾离子快速筛查。

检测方法

1. 样本制备

• 细胞处理：培养细胞经PBS洗涤后，以胰酶消化收集，避免金属离子污染。
• 裂解：采用非离子裂解液（如含1% Triton X-100的缓冲液）或低温超声破碎释放胞内钾。
• 亚细胞分离：通过差速离心或密度梯度离心获取线粒体等细胞器组分。

2. 预处理

• 去除干扰物：用EGTA螯合Ca²⁺、Mg²⁺，或通过超滤法分离大分子蛋白。
• 活细胞染色：将荧光探针（如10 μM PBFI-AM）负载至细胞，37℃孵育30分钟。

3. 检测流程

• AAS/ICP-MS法：裂解液经稀释后进样，标准曲线法计算浓度。
• 荧光探针法：激发光波长340/380 nm（PBFI），发射光500-540 nm，比率法校准K⁺浓度。
• 离子选择性电极：校准电极后插入细胞，直接读取电位差值并换算为浓度。

4. 数据分析

• 校正细胞体积：通过台盼蓝排除法或电容脉冲技术确定单个细胞容积。
• 动态监测：使用软件（如ImageJ）分析荧光强度随时间的变化曲线。

（注：所有操作需在离子稳定环境中进行，避免温度波动影响检测结果。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。