细胞内铁水平检测

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检测范围 细胞内铁水平检测适用于多种生物样本，包括原代培养细胞（如肝细胞、神经元、巨噬细胞）、永生化细胞系（如HEK293、HeLa、HepG2）、血液细胞（如红细胞、白细胞）以及病理模型细胞（如铁过载或铁缺乏的细胞模型）。此外，该检测还可用于研究铁代谢相关疾病（如贫血、血色病、神经退行性疾病）及癌症细胞的铁稳态调控机制。

检测项目

1. 总铁含量：检测细胞内游离铁、储存铁（铁蛋白、含铁血黄素）及线粒体铁的总和。
2. 亚铁离子（Fe²⁺）与三价铁离子（Fe³⁺）：区分细胞内不同氧化态铁的比例。
3. 铁蛋白（Ferritin）含量：评估铁储存状态。
4. 转铁蛋白受体（TfR1）表达量：反映细胞铁摄取能力。
5. 活性氧（ROS）水平：间接分析铁介导的氧化应激效应。

检测仪器

1. 分光光度计/酶标仪：用于比色法检测铁离子浓度（如Ferrozine法），波长范围510-560 nm。
2. 荧光显微镜/流式细胞仪：结合铁特异性荧光探针（如Calcein-AM、RPA、Phen Green SK）进行亚细胞铁定位及定量。
3. 电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）：高精度测定总铁含量，检测限低至0.1 ppb。
4. Western blot/PCR仪：分析铁代谢相关蛋白（如铁蛋白、TfR1）及基因表达水平。
5. 电子顺磁共振（EPR）光谱仪：检测铁硫簇及非血红素铁的存在形式。

检测方法

1. 比色法（Ferrozine法）

   • 步骤：裂解细胞后，加入盐酸（释放铁离子）与Ferrozine显色剂，形成紫红色复合物，测定562 nm吸光度，通过标准曲线计算总铁浓度。
   • 适用范围：总铁定量，灵敏度约1 μM。

2. 荧光探针法

   • 步骤：细胞负载Calcein-AM（荧光淬灭型探针），通过共聚焦显微镜或流式细胞术检测荧光恢复强度，定量细胞内游离Fe²⁺。
   • 优化条件：避光操作，探针浓度需根据细胞类型调整（通常0.1-1 μM）。

3. 普鲁士蓝染色法

   • 步骤：固定细胞后，用2%亚铁氰化钾与1%盐酸混合液处理，Fe³⁺与试剂生成蓝色沉淀，显微镜下观察铁颗粒分布。
   • 定量分析：结合ImageJ软件进行灰度值统计。

4. ICP-MS法

   • 步骤：细胞经硝酸-过氧化氢消解后，上机检测⁵⁶Fe同位素信号，内标法校准基体效应，直接计算总铁含量。
   • 质控要求：需同步检测空白样本及标准参考物质（如NIST 1643e）。

5. Western blot检测铁蛋白

   • 步骤：提取细胞总蛋白，SDS-PAGE电泳后转膜，抗铁蛋白一抗孵育，化学发光法显影，通过灰度分析定量表达水平。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。