聚合酶酶活检测

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信息概要

聚合酶酶活检测标准依据《ISO 23714:分子生物学用酶活性测定通用要求》，发布于2018年7月，现行有效版本为2022年修订版，未明确废止时间。该标准规定了酶活性检测的通用方法、数据分析和质量控制要求，涵盖酶促反应动力学、底物特异性及环境耐受性等核心参数。

检测项目

活性单位测定，比活性，最适温度，最适pH，pH稳定性，热稳定性，延伸速率，保真度，特异性，抑制剂耐受性，储存稳定性，DNase/RNase污染检测，引物结合效率，扩增效率，processivity，半衰期测定，批次一致性，金属离子依赖性，最适Mg²⁺浓度，辅因子需求，酶动力学参数（Km/Vmax）

检测范围

Taq DNA聚合酶，Pfu DNA聚合酶，Vent DNA聚合酶，逆转录酶，Tth DNA聚合酶，Bst DNA聚合酶，Phi29 DNA聚合酶，T4 DNA聚合酶，Klenow片段，Q5高保真DNA聚合酶，T7 RNA聚合酶，SP6 RNA聚合酶，Deep Vent DNA聚合酶，Tfl DNA聚合酶，Tli DNA聚合酶，TruSeq DNA聚合酶，HiFi DNA聚合酶，Hot Start DNA聚合酶，重组聚合酶，古菌聚合酶

检测方法

分光光度法（通过吸光度变化定量酶促反应产物）

荧光标记法（使用荧光底物实时监测酶活性）

凝胶电泳法（分析DNA/RNA扩增产物的长度和纯度）

实时定量PCR（评估扩增效率和动态范围）

热稳定性分析（温度梯度实验测定酶耐受性）

酶联免疫吸附法（ELISA检测酶蛋白含量）

等温滴定量热法（ITC测定酶与底物结合热力学参数）

圆二色光谱法（分析酶二级结构变化）

质谱法（鉴定酶修饰及降解产物）

动态光散射（DLS测定酶聚集状态）

高效液相色谱（HPLC分析产物纯度）

微量热泳动（MST测定酶-底物亲和力）

核磁共振（NMR研究酶动态构象）

电化学法（检测酶活性中心氧化还原状态）

放射性标记法（追踪同位素标记底物转化率）

检测仪器

紫外-可见分光光度计，荧光光谱仪，实时定量PCR仪，凝胶成像系统，等温滴定量热仪，圆二色光谱仪，质谱仪，动态光散射仪，高效液相色谱仪，微量热泳动仪，核磁共振仪，电化学工作站，酶标仪，热循环仪，微量离心机

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。