ev71病毒灭活检测

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检测范围

EV71（肠道病毒71型）灭活检测主要应用于疫苗研发、生物制品生产及病毒灭活工艺验证等领域。检测样本包括但不限于病毒培养液、灭活后的病毒悬液、疫苗半成品及成品。此外，针对环境或医疗器械中EV71病毒的灭活效果评估也属于检测范围。该检测需在生物安全二级（BSL-2）及以上实验室进行，确保操作安全。

检测项目

1. 病毒灭活效率：验证灭活工艺对EV71的灭活效果，确保无活病毒残留。
2. 病毒抗原完整性：评估灭活后病毒抗原的结构稳定性及免疫原性。
3. 残留宿主细胞DNA/蛋白：检测灭活样本中残留的宿主成分（如Vero细胞DNA）。
4. 灭活剂残留量：定量分析β-丙内酯、甲醛等灭活试剂的残留浓度。
5. 无菌试验：确认灭活后样本无细菌、真菌污染。

检测仪器

1. 实时荧光定量PCR仪：用于检测病毒核酸残留及宿主DNA含量。
2. 酶标仪：通过ELISA法分析病毒抗原含量及灭活剂残留。
3. 细胞培养系统：通过接种敏感细胞（如RD细胞）验证活病毒存在。
4. 电泳仪及成像系统：用于SDS-PAGE分析病毒蛋白完整性。
5. 高效液相色谱仪（HPLC）：定量检测灭活剂残留。

检测方法

1. 病毒灭活效果验证：

   • 将灭活样本接种于敏感细胞系（如RD细胞），连续观察7天，通过细胞病变效应（CPE）判断活病毒存在。
   • 采用空斑形成试验（Plaque Assay）定量分析病毒滴度下降情况。

2. 抗原完整性检测：

   • 使用SDS-PAGE分离病毒蛋白，通过考马斯亮蓝染色或Western Blot验证抗原表位保留。
   • ELISA法检测灭活后抗原与特异性抗体的结合能力。

3. 残留宿主DNA检测：

   • 提取样本DNA，通过qPCR定量分析宿主细胞DNA残留量，阈值需符合《中国药典》标准（≤100 pg/剂）。

4. 灭活剂残留检测：

   • β-丙内酯残留采用HPLC法，流动相为乙腈-水（30:70），紫外检测波长214 nm。
   • 甲醛残留通过乙酰丙酮显色法，在412 nm波长下比色定量。

5. 无菌试验：

   • 依据《中国药典》通则，将样本接种于硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养14天后观察微生物生长。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。