睡眠剥夺小鼠模型检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围 本研究采用成年C57BL/6小鼠（8-12周龄，雄性，体重25-30g），每组10只，分为睡眠剥夺组（72小时持续剥夺）和对照组。睡眠剥夺通过改良多平台水环境法实现，水箱内设置直径3cm的圆形平台，水深1cm，水温维持在25±1℃。对照组小鼠置于相同环境但无睡眠剥夺干预。所有实验符合动物伦理规范。

检测项目

1. 生理指标

   • 体重变化、核心体温（直肠测温）
   • 血清皮质醇水平（应激标志物）
   • 外周血炎症因子（IL-6、TNF-α）

2. 行为学检测

   • 旷场实验（自主活动与焦虑水平）
   • 高架十字迷宫（焦虑行为评估）
   • Morris水迷宫（空间学习记忆能力）
   • 悬尾实验（抑郁样行为）

3. 分子生物学检测

   • 海马组织氧化应激指标（SOD、MDA、GSH-Px）
   • 脑组织炎症因子（NF-κB、IL-1β）
   • 时钟基因表达（Bmal1、Per2 mRNA水平）
   • Tau蛋白磷酸化水平（p-Tau Ser396/Ser404）

4. 神经影像学

   • 小动物MRI检测脑区体积变化（海马、前额叶皮层）

检测仪器

1. 生理指标：

   • 电子天平（Mettler Toledo，精度0.01g）
   • 红外测温仪（FLIR T1030sc）
   • 酶标仪（BioTek Synergy H1，ELISA检测）

2. 行为学：

   • 旷场实验箱（50×50×40cm，配备ANY-maze追踪系统）
   • 高架十字迷宫（臂长30cm，Elevated Plus Maze Pro，TSE Systems）
   • 水迷宫圆形池（直径120cm，水温22±1℃，Smart 3.0视频分析系统）

3. 分子生物学：

   • 实时荧光定量PCR仪（Applied Biosystems 7500）
   • 多功能酶标仪（Molecular Devices SpectraMax M5）
   • 蛋白电泳系统（Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra）

4. 神经影像学：

   • 7.0T小动物磁共振成像仪（Bruker BioSpec 70/20 USR）

检测方法

1. 睡眠剥夺模型建立

   • 将小鼠置于多平台水箱中，平台间距10cm，当小鼠进入REM睡眠时因肌肉松弛落水而觉醒，持续干预72小时。对照组置于无水环境的相同平台。

2. 样本采集

   • 生理指标：剥夺结束后禁食6小时，麻醉后采集眼眶静脉丛血液，离心（3000rpm，15min）分离血清，-80℃保存。
   • 脑组织：断头取脑，分离海马与前额叶皮层，液氮速冻后转存-80℃备用。

3. 行为学流程

   • 旷场实验：小鼠自由探索5分钟，记录中央区停留时间与运动轨迹。
   • Morris水迷宫：每日4次训练，连续5天，记录逃避潜伏期；第6天撤平台，检测目标象限停留时间。

4. 分子检测

   • ELISA法：按试剂盒（R&D Systems）操作，测定血清皮质醇及炎症因子浓度。
   • RT-qPCR：TRIzol法提取RNA，PrimeScript RT试剂盒反转录，SYBR Green法检测基因表达，以β-actin为内参。
   • Western blot：RIPA裂解液提取蛋白，SDS-PAGE电泳后转膜，Anti-p-Tau（Abcam ab92676）一抗孵育，ECL显影。

5. MRI扫描

   • 异氟烷麻醉小鼠，固定于扫描床，T2加权序列扫描（参数：TR=2500ms，TE=33ms，层厚0.5mm），ITK-SNAP软件分析脑区体积。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。