细胞毒性实验检测

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检测范围

细胞毒性实验主要用于评估化学物质、药物、纳米材料、生物制剂或医疗器械等对体外培养细胞的毒性效应。检测对象包括但不限于哺乳动物细胞系（如HepG2、HEK293、RAW264.7）、原代细胞（如人成纤维细胞、肝细胞）及3D细胞模型（如类器官）。实验涵盖短期（24-72小时）及长期（7-14天）暴露条件下的毒性评价，适用于药物开发、化妆品安全性测试、环境毒理学研究及医疗器械生物相容性分析等领域。

检测项目

1. 细胞存活率：通过代谢活性或膜完整性评估毒性物质对细胞增殖或存活的影响。
2. 半数抑制浓度（IC50）：量化物质抑制50%细胞活性的浓度，用于毒性强度分级。
3. 细胞形态学变化：观察细胞皱缩、空泡化、脱落等病理特征。
4. 乳酸脱氢酶（LDH）释放：检测细胞膜损伤程度。
5. 凋亡与坏死标志物：如Annexin V/PI双染法区分凋亡与坏死细胞比例。

检测仪器

1. 酶标仪（Microplate Reader）：用于吸光度或荧光信号检测（如CCK-8、MTT、LDH试剂盒），型号包括BioTek Synergy H1、Thermo Fisher Multiskan GO。
2. 倒置光学显微镜：观察细胞形态变化（如Olympus CKX53、Nikon Eclipse TS2）。
3. 流式细胞仪：定量分析细胞凋亡与坏死（如BD FACSCelesta、Beckman Coulter CytoFLEX）。
4. LDH检测试剂盒：配套分光光度计或化学发光仪。
5. CO₂培养箱：维持细胞培养环境（如Thermo Scientific Heracell 150i）。
6. 离心机：用于细胞悬液制备（如Eppendorf 5430R）。

检测方法

1. 细胞培养与处理

   • 细胞系于含10%胎牛血清的DMEM/RPMI-1640培养基中培养，37℃、5% CO₂条件下传代至对数生长期。
   • 待测物质用DMSO/PBS溶解，梯度稀释至0.1-1000 μg/mL浓度范围，过滤除菌后备用。

2. 细胞接种与染毒

   • 将细胞以1×10⁴ cells/孔密度接种于96孔板，贴壁24小时后更换含不同浓度受试物的培养基，设空白对照（无细胞）与阴性对照（仅培养基）。
   • 染毒时间为24-72小时，依据物质作用机制调整。

3. 细胞活性检测（CCK-8法）

   • 染毒结束后，每孔加入10 μL CCK-8试剂，避光孵育2小时。
   • 酶标仪450 nm波长检测吸光度，计算细胞存活率： 存活率(%)=(�样品−�空白)(�对照−�空白)×100%存活率(%)=(A对照​−A空白​)(A样品​−A空白​)​×100%

4. LDH释放检测

   • 收集细胞培养上清液，12,000 rpm离心5分钟。
   • 按LDH试剂盒说明书混合上清与反应液，室温避光反应30分钟，490 nm波长测定吸光度，计算LDH释放率。

5. 形态学与凋亡分析

   • 倒置显微镜下拍摄细胞形态（200×放大），记录病理特征。
   • 流式细胞术：收集细胞，Annexin V-FITC/PI染色15分钟，上机检测凋亡与坏死比例。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。