融合蛋白检测

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融合蛋白检测范围 融合蛋白检测主要应用于生物制药、疾病机制研究、基因治疗及重组蛋白药物开发等领域。检测对象包括通过基因工程技术构建的各类融合蛋白，如抗体-药物偶联物（ADC）、荧光标记蛋白、酶融合蛋白等。检测范围涵盖哺乳动物细胞、酵母、细菌等不同表达系统的产物，以及药物开发过程中原料药、中间体及成品的质量控制。工业检测需符合《中国药典》或国际标准（如USP、EP）对生物制品的规范要求。

融合蛋白检测项目

1. 表达水平检测：定量分析融合蛋白在宿主细胞中的表达量，常用Western Blot、ELISA或流式细胞术。
2. 分子量测定：验证目标蛋白与标签蛋白（如His标签、GST标签）的预期分子量，采用SDS-PAGE结合质谱分析。
3. 纯度分析：检测杂质（宿主细胞蛋白、核酸）残留，使用HPLC、CE-SDS或SEC（尺寸排阻色谱）。
4. 结构完整性检测：评估融合位点稳定性及二级/三级结构，通过圆二色谱（CD）、X射线晶体学或核磁共振（NMR）。
5. 功能活性验证：基于生物学功能设计实验，如酶联免疫吸附测定（ELISA检测结合活性）、细胞杀伤实验（评估治疗性融合蛋白效力）。

融合蛋白检测仪器

• 色谱类：高效液相色谱（HPLC）、超高效液相色谱（UPLC）、离子交换色谱（IEC）。
• 电泳设备：毛细管电泳仪（CE-SDS）、凝胶成像系统（SDS-PAGE分析）。
• 光谱仪：圆二色光谱仪（CD）、紫外-可见分光光度计（浓度测定）。
• 质谱仪：MALDI-TOF、Q-TOF（精确分子量测定及翻译后修饰分析）。
• 生物分子互作仪：表面等离子共振仪（SPR，亲和力及动力学参数测定）。
• 功能活性设备：酶标仪（ELISA读数）、流式细胞仪（细胞表面结合实验）、微量热泳动仪（MST）。

融合蛋白检测方法

1. Western Blot：通过SDS-PAGE分离蛋白后转膜，利用特异性一抗/二抗杂交确认目标条带。
2. ELISA定量：包被捕获抗体，加入待测样品与检测抗体，通过显色反应计算融合蛋白浓度。
3. SEC-HPLC：采用TSK-GEL色谱柱，以磷酸盐缓冲液为流动相，检测洗脱峰面积评估纯度。
4. SPR动力学分析：将靶分子固定于芯片表面，实时监测融合蛋白结合/解离速率，计算KD值。
5. 细胞活性检测：通过MTT法或流式细胞术（Annexin V/PI染色）评估融合蛋白对靶细胞的杀伤效率。
6. 翻译后修饰检测：使用胰酶消化后，通过LC-MS/MS鉴定磷酸化、糖基化等修饰位点。

所有检测需参照《生物制品质量控制分析方法指南》或ISO 17025标准，确保数据重复性与可比性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。