微量蛋白定量检测

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微量蛋白定量检测技术概述

1. 检测范围 微量蛋白定量检测适用于多种生物样本，包括但不限于血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆液、细胞培养上清液及纯化后的蛋白溶液。检测浓度范围通常在0.1 µg/mL 至 200 µg/mL之间，具体取决于样本类型及所选检测方法的灵敏度。对于极低浓度样本（如<0.1 µg/mL），可通过浓缩或采用高灵敏度试剂优化检测结果。

2. 检测项目 检测的核心目标为生物样本中蛋白质的绝对浓度，常见检测项目包括：

• 总蛋白浓度测定：适用于细胞或组织裂解液中的总蛋白含量分析。
• 特定蛋白定量：如抗体、酶、细胞因子、生长因子等目标蛋白的浓度检测。
• 复合物中蛋白含量分析：例如免疫沉淀产物、外泌体或病毒颗粒中的蛋白组分定量。

3. 检测仪器 检测过程依赖高精度仪器完成，主要包括：

• 分光光度计：用于紫外吸收法（A280）检测高纯度蛋白溶液。
• 酶标仪：搭配微孔板，适用于BCA法、Bradford法等比色或荧光检测。
• 荧光检测仪：用于基于荧光染料（如Qubit系统）的超微量蛋白检测。
• 自动化蛋白分析系统：如Agilent 2100生物分析仪，支持快速、高通量检测。

4. 检测方法 常用方法根据原理分为以下三类：

• 比色法：
  • BCA法（二辛可宁酸法）：基于碱性条件下蛋白质将Cu²⁺还原为Cu⁺，与BCA试剂显色，检测562 nm吸光度，灵敏度为0.5-20 µg/mL。
  • Bradford法：利用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后颜色变化，检测595 nm吸光度，检测范围1-1000 µg/mL。
• 荧光法： 采用荧光染料（如SYPRO Orange）特异性结合蛋白质，通过荧光强度定量，灵敏度可达0.01 µg/mL，适用于极低浓度样本。
• 免疫学方法： ELISA（酶联免疫吸附试验）通过抗原-抗体反应定量特定蛋白，灵敏度为pg/mL级，需匹配目标蛋白的特异性抗体。

操作流程标准化：所有检测需严格遵循试剂说明书，包括样本稀释、标准曲线制备（使用牛血清白蛋白BSA或重组蛋白）、反应条件（温度、时间）控制及数据校正（如去除干扰物质影响）。检测结果通过软件分析（如SoftMax Pro）生成浓度报告。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。