蛋白组检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

蛋白组检测技术报告

1. 检测范围 本检测覆盖以下样本类型及物种：

• 样本类型：细胞裂解液、组织匀浆液、血清/血浆、脑脊液、尿液等生物液体。
• 物种范围：人类、小鼠、大鼠及其他模式生物。
• 检测目标：全蛋白质组覆盖，包括高丰度与低丰度蛋白，检测分子量范围覆盖5-250 kDa。

2. 检测项目 本次检测包含以下核心分析内容：

• 蛋白定量分析：基于同位素标记（如TMT、iTRAQ）或无标记定量（Label-free）技术，提供绝对或相对定量结果。
• 差异表达蛋白筛选：通过统计学分析（如t检验、ANOVA）筛选组间差异蛋白（Fold Change ≥1.5，p值<0.05）。
• 翻译后修饰（PTM）分析：磷酸化、泛素化、乙酰化等修饰位点鉴定。
• 功能注释与通路分析：基于GO（Gene Ontology）、KEGG、Reactome数据库的蛋白功能分类及信号通路富集分析。
• 蛋白互作网络构建：通过STRING数据库预测蛋白相互作用网络。

3. 检测仪器 检测采用以下核心设备及软件：

• 质谱仪：Thermo Fisher Q Exactive™ HF-X 高分辨质谱仪（分辨率为240,000 @ m/z 200），配备纳升液相色谱系统（EASY-nLC 1200）。
• 液相色谱系统：Agilent 1290 Infinity II UHPLC，搭配C18反相色谱柱（75 μm × 25 cm，1.9 μm粒径）。
• 数据分析平台：Proteome Discoverer 2.5（Thermo Fisher）、MaxQuant（版本2.1.0）及R语言（limma、clusterProfiler包）。

4. 检测方法 4.1 样本前处理

• 蛋白提取：裂解液（8 M尿素，2% SDS）超声破碎，BCA法测定浓度。
• 还原烷基化：10 mM DTT（56℃，30分钟）还原二硫键，55 mM碘乙酰胺（室温避光，30分钟）烷基化。
• 酶解：胰蛋白酶（Trypsin Gold, Promega）37℃过夜酶解（酶:底物=1:50），C18柱脱盐后冻干浓缩。

4.2 质谱分析

• 色谱条件：流动相A（0.1%甲酸水溶液），流动相B（0.1%甲酸乙腈溶液）；梯度洗脱（5%-35% B，90分钟）。
• 质谱参数：全扫描范围300-1800 m/z，一级MS分辨率120,000，二级MS分辨率15,000；HCD碎裂能量28%。

4.3 数据分析

• 数据库搜索：UniProt物种特异性数据库（含常见污染物），设置固定修饰（羧甲基化）及可变修饰（氧化、磷酸化）。
• 质控标准：假阳性率（FDR）≤1%，至少2条独特肽段匹配的蛋白方纳入分析。

（全文完）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。