蛋白免疫原性检测

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蛋白免疫原性检测范围 蛋白免疫原性检测主要应用于生物制药、疫苗开发、治疗性蛋白药物（如单克隆抗体、重组蛋白）及基因治疗产品的研发与质量控制。其核心目标是评估外源性蛋白或修饰蛋白在机体内引发免疫反应的潜在风险，确保药物的安全性和有效性。检测对象包括但不限于药物候选分子、生物类似药、疫苗抗原及基因编辑工具蛋白（如CRISPR相关蛋白）。

检测项目

1. 抗药抗体（Anti-Drug Antibody, ADA）检测：包括中和抗体（NAb）与非中和抗体（Non-NAb）的定性及定量分析。
2. 细胞免疫反应检测：评估T细胞活化、增殖及细胞因子释放（如IFN-γ、IL-2、IL-6）。
3. 交叉反应性分析：检测抗体与内源性蛋白或同类药物的交叉结合能力。
4. HLA（人类白细胞抗原）分型关联性研究：评估特定HLA亚型对免疫原性的影响。
5. 表位定位（Epitope Mapping）：确定抗体结合的具体抗原表位区域。
6. 免疫复合物（Immune Complex）检测：分析蛋白-抗体复合物的形成及其稳定性。

检测仪器

1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）平台：包括酶标仪（如BioTek Synergy H1）和自动化洗板机。
2. 流式细胞仪（如BD FACSCanto II）：用于细胞免疫反应的多参数分析。
3. 表面等离子体共振仪（SPR，如Biacore T200）：实时监测抗体-抗原结合动力学。
4. 电化学发光检测系统（如MSD平台）：高灵敏度检测ADA及细胞因子。
5. 高通量基因测序仪（如Illumina MiSeq）：HLA分型及免疫相关基因分析。
6. 质谱仪（如Thermo Q Exactive）：表位定位及免疫复合物结构解析。
7. 动态光散射仪（DLS）与尺寸排阻色谱-多角度光散射联用仪（SEC-MALS）：评估免疫复合物的粒径分布及稳定性。

检测方法

1. 抗药抗体检测：

   • ELISA法：将目标蛋白包被于微孔板，加入待测血清后检测结合抗体（二抗标记HRP或荧光染料）。
   • 桥联法（Bridging ELISA）：使用生物素-链霉亲和素系统提高检测灵敏度，适用于低滴度抗体分析。
   • 电化学发光法（ECL）：利用MSD多阵列板实现多重ADA检测，动态范围达1:1000至1:1,000,000。

2. 中和抗体检测：

   • 细胞报告基因法：构建靶蛋白依赖性报告基因细胞系（如荧光素酶），通过信号抑制率计算中和活性。
   • 竞争性结合试验：使用标记配体与待测抗体竞争结合靶蛋白，量化中和能力。

3. 细胞免疫反应检测：

   • T细胞增殖试验：通过CFSE染色或³H-胸腺嘧啶掺入法评估T细胞增殖水平。
   • 细胞内细胞因子染色（ICS）：流式细胞术检测抗原刺激后T细胞分泌的细胞因子。

4. 表位定位分析：

   • 肽库扫描法：合成覆盖靶蛋白全长的重叠肽段（15-20mer），通过ELISA或SPR筛选阳性表位。
   • 氢氘交换质谱（HDX-MS）：解析抗体结合引起的靶蛋白构象变化，定位表位区域。

5. 免疫复合物检测：

   • 动态光散射（DLS）：实时监测复合物粒径变化，评估聚集状态。
   • SEC-MALS联用：通过分子量及流体力学半径精确表征复合物组成。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。