大蛋白检测

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检测范围 大蛋白检测主要针对分子量大于50 kDa的蛋白质，涵盖生物样本中的结构蛋白、酶、抗体、细胞因子及跨膜蛋白等。检测范围包括但不限于以下样本类型：

1. 体液样本：血清、血浆、脑脊液、尿液等。
2. 组织样本：冻存或石蜡包埋的组织切片、匀浆液等。
3. 细胞样本：细胞裂解液、细胞培养上清液等。
4. 重组蛋白：基因工程表达的大分子蛋白质药物（如单克隆抗体、融合蛋白）。

检测项目

1. 定量分析：测定目标蛋白的浓度（如通过BCA法、Bradford法）。
2. 定性分析：鉴定蛋白质种类及分子量（如SDS-PAGE、质谱分析）。
3. 翻译后修饰检测：磷酸化、糖基化、泛素化等修饰位点及程度分析。
4. 相互作用研究：蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸结合能力检测（如免疫共沉淀、Pull-down实验）。
5. 功能活性检测：酶活性、抗体中和活性、受体结合活性等。

检测仪器

1. 质谱仪：
   • MALDI-TOF质谱：用于高通量蛋白质鉴定及分子量测定。
   • LC-MS/MS：结合液相色谱，实现复杂样本中低丰度蛋白的精准分析。
2. 电泳系统：
   • SDS-PAGE凝胶电泳：分离蛋白质并估算分子量。
   • Western blot仪：通过抗体杂交检测特定蛋白表达。
3. 色谱系统：
   • 高效液相色谱（HPLC）：用于蛋白质纯度分析及分离（如反相色谱、分子排阻色谱）。
   • 超高效液相色谱（UHPLC）：提升分辨率和检测速度。
4. 多功能酶标仪：支持ELISA、荧光标记蛋白定量及活性检测。
5. 生物分子相互作用仪：表面等离子体共振（SPR）技术实时分析蛋白结合动力学。

检测方法

1. 样品预处理：

   • 体液样本：离心去除细胞碎片，添加蛋白酶抑制剂防止降解。
   • 组织/细胞样本：裂解液（含RIPA缓冲液）破碎细胞，离心获取上清液。
   • 重组蛋白：透析或超滤去除杂质，调整至适宜浓度。

2. 分离与纯化：

   • 亲和层析：利用His标签、Protein A/G等特异性结合目标蛋白。
   • 离子交换色谱：根据电荷差异分离蛋白质。
   • 分子筛色谱：按分子量大小分离蛋白质。

3. 检测技术：

   • 免疫分析法（ELISA、化学发光法）：基于抗原-抗体反应定量目标蛋白。
   • 电泳结合染色/转印：考马斯亮蓝染色或银染定性分析，转印后通过一抗/二抗显色。
   • 质谱前处理：酶解蛋白为肽段，经脱盐、富集后上机分析。

4. 数据分析：

   • 质谱数据通过MaxQuant、Proteome Discoverer等软件匹配数据库。
   • Western blot结果通过ImageJ量化条带灰度值。
   • 色谱峰面积积分计算纯度或浓度。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。