蛋白分子量检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

蛋白分子量检测范围 蛋白分子量检测范围通常覆盖5 kDa至300 kDa的蛋白质，具体取决于检测方法及仪器性能。例如，SDS-PAGE常规检测范围为10-250 kDa，而质谱技术可扩展至1-1000 kDa，适用于小肽链和大分子复合物的分析。特殊修饰蛋白（如糖基化或磷酸化）需结合预处理步骤以排除干扰。

蛋白分子量检测项目

1. 纯度分析：评估目标蛋白与杂质的分子量差异。
2. 亚基组成分析：检测多聚体蛋白中亚基的分子量及比例。
3. 分子量精确测定：通过高分辨率技术（如质谱）确定蛋白精确质量。
4. 翻译后修饰鉴定：分析糖基化、磷酸化等修饰引起的分子量变化。
5. 降解产物检测：识别蛋白水解或变性产生的片段。

蛋白分子量检测仪器

1. SDS-PAGE电泳系统：基于凝胶电泳分离蛋白，搭配考马斯亮蓝或银染显色。
2. 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）：用于高精度分子量测定及修饰分析。
3. 高效液相色谱（HPLC）：结合凝胶过滤层析或反相色谱分离蛋白。
4. Western Blot系统：通过特异性抗体验证目标蛋白分子量。
5. 毛细管电泳（CE）：适用于微量样品的高效分离与检测。

蛋白分子量检测方法

1. SDS-PAGE法

   • 步骤：
     1. 制胶：配制分离胶和浓缩胶（如12%分离胶）。
     2. 样品处理：蛋白与SDS缓冲液煮沸变性。
     3. 上样与电泳：恒压电泳（如80 V 30分钟，120 V 60分钟）。
     4. 染色与脱色：考马斯亮蓝染色后脱色至背景清晰。
     5. 成像分析：通过分子量标准品比对目标条带。

2. 质谱法（以MALDI-TOF为例）

   • 步骤：
     1. 样品制备：蛋白酶解或直接溶解于基质溶液（如芥子酸）。
     2. 点样与结晶：将混合液点于靶板，自然干燥形成晶体。
     3. 激光解吸：激光激发使样品离子化。
     4. 质量分析：记录离子飞行时间，计算质荷比（m/z）。
     5. 数据分析：通过标准曲线或数据库匹配确定分子量。

3. 凝胶过滤层析法

   • 步骤：
     1. 柱平衡：用缓冲液平衡凝胶柱（如Superdex 200）。
     2. 上样与洗脱：蛋白样品经柱分离，收集洗脱峰。
     3. 标准曲线绘制：利用已知分子量蛋白建立洗脱体积-分子量关系。
     4. 分子量计算：根据目标蛋白洗脱体积推算分子量。

4. 毛细管电泳法

   • 步骤：
     1. 毛细管预处理：用NaOH活化毛细管内壁。
     2. 缓冲液填充：注入含SDS的运行缓冲液。
     3. 电泳分离：高压电场下分离蛋白。
     4. 紫外检测：实时监测200-220 nm吸光度。
     5. 数据分析：对比迁移时间与标准品计算分子量。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。