蛋白互作检测

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信息概要

蛋白互作检测标准基于国际通用的相互作用分析指南（ISO 21748:2015），发布时间为2015年，现行有效版本为2020年修订版，未明确废止时间。该标准涵盖蛋白结合亲和力、动力学参数、特异性验证及复合物稳定性等核心检测指标，适用于药物开发、基础研究和诊断试剂的质控。

检测项目

亲和力常数（Kd）, 结合速率（kon）, 解离速率（koff）, 结合位点数量（n值）, 热稳定性（Tm值）, 化学稳定性（IC50）, 交叉反应性验证, 复合物分子量测定, 表观结合能（ΔG）, 荧光共振能量转移效率（FRET）, 表面电荷分布, 二硫键分析, 磷酸化修饰影响, 糖基化干扰测试, 构象变化检测, 竞争性结合抑制率, 协同效应分析, 温度依赖性结合, pH敏感性测试, 离子强度影响评估

检测范围

受体-配体相互作用, 酶-底物复合物, 抗体-抗原结合, 信号通路蛋白复合物, 转录因子-DNA结合, 分子伴侣-客户蛋白, 病毒衣壳-宿主蛋白, 细胞膜蛋白互作, 核糖体亚基组装, 激酶-磷酸酶调控, 细胞黏附分子互作, 细胞因子-受体结合, 自噬相关蛋白复合体, 泛素化连接酶-底物, 染色质重塑复合物, 离子通道调控因子, 代谢酶复合体, 病原体-宿主靶标互作, 核酸结合蛋白复合物, 分子马达蛋白组装

检测方法

表面等离子体共振技术（SPR）：实时监测分子结合动力学参数。

等温滴定量热法（ITC）：通过热量变化测定结合亲和力与热力学参数。

荧光偏振（FP）：利用荧光标记分析分子间结合特异性。

生物膜干涉技术（BLI）：通过光学干涉信号检测结合过程。

微量热泳动（MST）：依据温度梯度下分子迁移差异计算结合常数。

免疫共沉淀（Co-IP）：验证生理条件下蛋白复合物的天然互作。

双分子荧光互补（BiFC）：通过荧光恢复确认活细胞内的相互作用。

交联质谱（XL-MS）：鉴定蛋白结合界面的空间结构信息。

圆二色光谱（CD）：分析结合引起的二级结构变化。

核磁共振（NMR）：解析小分子与蛋白的动态结合位点。

蛋白质芯片技术：高通量筛选未知互作靶标。

荧光共振能量转移（FRET）：检测纳米级距离内的分子结合事件。

静态光散射（SLS）：测定复合物分子量及聚集状态。

AlphaScreen/AlphaLISA：基于能量转移的高灵敏度均相检测。

动态光散射（DLS）：评估溶液环境中复合物的粒径分布。

检测仪器

Biacore T200 SPR仪, MicroCal PEAQ-ITC, SpectraMax i3x多功能酶标仪, Octet RED96生物层干涉仪, Monolith NT.115 MST仪, Q Exactive HF-X质谱仪, J-1500圆二色光谱仪, Bruker AVANCE III HD核磁共振仪, NanoTemper Prometheus NT.48, Zeiss LSM 880共聚焦显微镜, Wyatt DynaPro NanoStar动态光散射仪, PerkinElmer EnVision多模式读板机, Agilent 6545XT AdvanceBio LC-MS, Beckman Coulter Optima XPN-100超速离心机, Malvern Panalytical Zetasizer Pro粒径分析仪

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。