组蛋白乙酰化水平检测

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检测范围

组蛋白乙酰化水平的检测主要应用于基础医学研究、表观遗传调控机制分析、疾病发生发展机制探索（如肿瘤、神经退行性疾病、代谢性疾病等）、药物靶点筛选及表观遗传药物的疗效评估。检测样本涵盖细胞系、动物组织（如小鼠肝脏、脑组织）、临床活检样本（如肿瘤组织）以及体外培养的原代细胞等。

检测项目

1. 特定组蛋白乙酰化位点检测：包括但不限于H3K9ac、H3K27ac、H4K16ac等关键位点的乙酰化修饰水平。
2. 全基因组组蛋白乙酰化分析：通过高通量技术绘制组蛋白乙酰化在全基因组范围内的分布图谱。
3. 组蛋白乙酰转移酶（HATs）与去乙酰化酶（HDACs）活性检测：间接评估乙酰化调控酶的活性变化。

检测仪器

1. Western Blot系统：包括SDS-PAGE电泳仪、半干转膜仪、化学发光成像系统（如Bio-Rad ChemiDoc MP）。
2. 质谱仪：如高分辨率液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS，如Thermo Fisher LTQ Orbitrap）用于精确测定乙酰化修饰位点及丰度。
3. 染色质免疫共沉淀测序（ChIP-seq）平台：包括超声破碎仪（Covaris S220）、高通量测序仪（如Illumina NovaSeq 6000）。
4. 酶标仪：如Molecular Devices SpectraMax用于荧光或比色法测定酶活性。

检测方法

1. Western Blot法

   • 样本处理：裂解细胞或组织提取总蛋白，定量后加载至SDS-PAGE胶进行电泳分离。
   • 转膜与抗体孵育：将蛋白转至PVDF膜，依次使用一抗（如抗-H3K9ac，Abcam ab4441）和HRP标记二抗孵育。
   • 信号检测：通过ECL化学发光显影，利用Image Lab软件定量条带灰度值。

2. 质谱法

   • 样品制备：组蛋白经酸提取、丙酰化修饰后，用胰蛋白酶消化生成肽段。
   • LC-MS/MS分析：肽段经C18色谱柱分离后进入质谱，通过碎裂图谱鉴定乙酰化位点及修饰水平。

3. ChIP-seq技术

   • 染色质交联与片段化：甲醛固定细胞后超声破碎染色质至200-500 bp片段。
   • 免疫沉淀：使用乙酰化组蛋白特异性抗体（如H3K27ac，Cell Signaling 8173）富集目标DNA-蛋白复合物。
   • 文库构建与测序：纯化DNA后建库，通过高通量测序获得全基因组乙酰化图谱。

4. 酶活性检测

   • HAT/HDAC活性测定：使用荧光标记底物（如Acetyl-CoA类似物），在酶反应后通过荧光强度（激发/发射波长380/460 nm）或吸光度（405 nm）定量酶活性变化。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。