蛋白质谱检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围 本次蛋白质谱检测覆盖以下样本类型及分析维度：

1. 样本类型：包括但不限于血清、血浆、组织匀浆液、细胞裂解液、外泌体及纯化后的蛋白质溶液。
2. 物种来源：适用于人类、小鼠、大鼠等模式生物，以及细菌、真菌等微生物来源的蛋白质。
3. 分析深度：可检测低丰度蛋白质（检测限低至1 ng/mL），并覆盖分子量范围5-250 kDa的肽段及完整蛋白。
4. 修饰类型：支持磷酸化、糖基化、泛素化等常见翻译后修饰（PTMs）的鉴定。

检测项目

1. 蛋白质定性分析：基于肽段质量指纹图谱（PMF）及串联质谱（MS/MS）数据，实现蛋白质的精确鉴定。
2. 定量蛋白质组学：
   • 标记定量：采用TMT/iTRAQ标记技术进行多组间差异蛋白分析。
   • 非标记定量（Label-free）：通过峰面积或谱计数评估蛋白质表达量变化。
3. 翻译后修饰分析：针对目标修饰类型进行富集（如TiO2富集磷酸化肽段），结合数据库搜索鉴定修饰位点。
4. 相互作用蛋白鉴定：通过免疫共沉淀（Co-IP）或Pull-down实验联合质谱，筛选相互作用蛋白网络。

检测仪器

1. 液相色谱-质谱联用系统（LC-MS/MS）：
   • 色谱系统：Thermo Scientific UltiMate 3000 nano-LC，配备C18反相色谱柱（粒径2 μm，内径75 μm）。
   • 质谱仪：Orbitrap Fusion Lumos Tribrid质谱仪，配备高场不对称波形离子迁移谱（FAIMS）接口，分辨率达240,000（m/z 200）。
2. 辅助设备：
   • 蛋白质消化装置：使用Trypsin/Lys-C混合酶解体系（37℃，12小时）。
   • 肽段脱盐柱：C18 StageTip微柱。
3. 数据分析软件：
   • 数据库搜索：MaxQuant（版本2.1.0）联合UniProt数据库。
   • 修饰分析：PTMProphet算法及PhosphoSitePlus修饰位点库。

检测方法

1. 样品前处理：
   • 蛋白质提取：采用RIPA裂解液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解样本，BCA法测定浓度。
   • 还原烷基化：加入DTT（10 mM，56℃ 30分钟）及碘乙酰胺（50 mM，避光30分钟）处理。
2. 酶解与肽段纯化：
   • 酶切条件：Trypsin与Lys-C（1:25酶底物比）于37℃孵育12小时。
   • 脱盐：使用C18柱脱盐，真空离心干燥后复溶于0.1%甲酸。
3. LC-MS/MS分析：
   • 色谱条件：流速300 nL/min，梯度为5%-35%乙腈（含0.1%甲酸），持续120分钟。
   • 质谱参数：
     • 一级扫描：m/z范围350-1500，分辨率120,000。
     • 二级扫描：HCD碎裂（碰撞能量28%），动态排除时间30秒。
4. 数据解析：
   • 数据库匹配：设定母离子质量误差±10 ppm，子离子误差±0.02 Da。
   • 结果过滤：假阳性率（FDR）≤1%，肽段匹配数≥2。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。