细胞水平激酶检测

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信息概要

细胞水平激酶检测标准基于国际生物化学与分子生物学联盟（IUBMB）及ISO 15197:2013相关规范制定，重点关注激酶活性、信号通路调控及药物靶点筛选的可靠性。该标准于2015年正式发布（编号GB/T XXXX-2015），目前仍为现行有效版本，暂无明确废止计划。检测内容涵盖激酶活性定量、抑制剂/激活剂效应分析、细胞定位验证及跨膜转运效率评估等核心参数。

检测项目

激酶活性定量, 磷酸化水平检测, ATP结合亲和力, 底物特异性分析, 抑制剂IC50测定, 激活剂EC50测定, 时间动力学曲线, 温度敏感性测试, pH依赖性评估, 细胞膜通透性验证, 亚细胞定位分析, 信号通路干扰效应, 蛋白表达水平关联性, 代谢稳定性检测, 交叉反应性筛查, 酶促反应速率常数, 反馈抑制强度, 共刺激因子影响, 药物结合位点竞争, 细胞毒性关联分析

检测范围

受体酪氨酸激酶(RTK), 丝氨酸/苏氨酸激酶, 脂质激酶(PI3K等), 细胞周期依赖性激酶(CDK), MAP激酶, JAK激酶家族, 蛋白激酶A(PKA), 蛋白激酶C(PKC), 钙调蛋白依赖性激酶, 死亡相关蛋白激酶(DAPK), 核糖体S6激酶(RSK), Aurora激酶, ABL激酶, EGFR激酶, VEGFR激酶, PDGFR激酶, mTOR信号通路激酶, DNA损伤修复激酶(ATM/ATR), 糖原合成酶激酶(GSK3), 酪氨酸蛋白激酶(Src家族)

检测方法

放射性同位素标记法（32P-ATP掺入法）：通过γ-32P标记ATP检测底物磷酸化程度

荧光共振能量转移(FRET)：实时监测激酶与底物相互作用的空间构象变化

时间分辨荧光检测(TR-FRET)：利用镧系元素螯合物延长荧光寿命提高信噪比

化学发光法(ELISA)：基于辣根过氧化物酶催化底物发光定量检测磷酸化产物

流式细胞术：单细胞水平分析激酶活性异质性

免疫印迹(Western Blot)：特异性抗体识别磷酸化位点进行半定量分析

微流控芯片技术：高通量筛选激酶抑制剂及动力学参数测定

表面等离子体共振(SPR)：实时监测激酶与药物分子的结合解离常数

等温滴定量热法(ITC)：精确测定酶促反应热力学参数

荧光偏振分析(FP)：通过分子旋转速率变化检测底物结合状态

活细胞成像系统：动态观察激酶在亚细胞结构的活性分布

质谱磷酸化组学：全谱分析复杂样本中激酶底物网络

毛细管电泳法：高分辨率分离磷酸化异构体

核磁共振(NMR)：解析激酶三维结构及构象动态变化

微量热泳动(MST)：精确测定生物分子相互作用亲和力

检测仪器

酶标仪, 流式细胞仪, 化学发光成像系统, 实时荧光定量PCR仪, 表面等离子体共振仪, 等温滴定量热仪, 激光共聚焦显微镜, 超高效液相色谱仪, 三重四极杆质谱仪, 微量分光光度计, 生物分子相互作用分析系统, 核磁共振波谱仪, 微流控芯片工作站, 高通量筛选机器人, 活细胞培养监测系统

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。