流式细胞检测

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流式细胞检测技术应用概述

1. 检测范围 流式细胞检测技术广泛应用于免疫学、血液学、肿瘤学、干细胞研究及感染性疾病等领域。其检测对象包括外周血、骨髓、淋巴结、组织分离细胞、培养细胞等生物样本。临床与科研场景中，该技术主要用于细胞表面/胞内标志物分析、细胞功能评估（如凋亡、增殖、细胞周期）、免疫分型及稀有细胞群体鉴定等。

2. 检测项目 （1）免疫表型分析：通过荧光标记抗体检测细胞表面或胞内抗原（如CD3、CD4、CD8、CD19、CD34），用于免疫细胞分群及白血病/淋巴瘤分型。 （2）细胞周期与增殖检测：采用碘化丙啶（PI）或EdU标记DNA，分析细胞周期阶段（G0/G1、S、G2/M期）及增殖活性。 （3）细胞凋亡检测：通过Annexin V-FITC/PI双染法区分早期凋亡（Annexin V+ PI−）与晚期凋亡/坏死细胞（Annexin V+ PI+）。 （4）细胞内细胞因子检测：利用布雷菲德菌素A阻断分泌途径，结合破膜剂检测IL-2、IFN-γ等胞内因子表达。 （5）功能性检测：包括活性氧（ROS）水平、线粒体膜电位（JC-1染色）及钙离子浓度动态监测等。

3. 检测仪器 （1）流式细胞仪：

• BD FACSCanto™ II：配置3激光（488 nm蓝、633 nm红、405 nm紫）及8色检测通道，支持多参数分析。
• Beckman Coulter CytoFLEX：采用半导体激光器，具备高灵敏度及低背景噪声特性。
• BD LSRFortessa™：适用于复杂多色实验（最高支持20色）。 （2）数据分析软件：FlowJo v10、BD FACSDiva™、Kaluza Analysis等，用于设门、统计及可视化。

4. 检测方法 （1）样本制备：

• 血液/骨髓样本：采用密度梯度离心法（如Ficoll分离液）富集单个核细胞。
• 组织样本：机械研磨联合胶原酶消化获得单细胞悬液，经70 μm滤网过滤去除碎片。
• 固定与破膜：检测胞内抗原时，使用4%多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100破膜处理。

（2）抗体标记：

• 直接标记法：荧光偶联一抗（如FITC、PE、APC）与细胞室温避光孵育15-30分钟。
• 间接标记法：适用于无直接标记抗体的情况，通过二抗放大信号。

（3）仪器校准：

• 每日开机后使用标准微球（如BD CST beads）校准光路及荧光补偿，确保PMT电压与灵敏度一致。

（4）数据采集与分析：

• 设定前向散射（FSC）与侧向散射（SSC）阈值排除碎片，圈选目标细胞群体。
• 采用荧光减一对照（FMO）及同型对照确定阳性阈值。
• 通过二维点图、等高线图或直方图展示数据，计算阳性细胞百分比及平均荧光强度（MFI）。

（全文完）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。