细胞实验检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

细胞实验检测范围 细胞实验检测主要涵盖体外培养的各类细胞，包括原代细胞、永生化细胞系、干细胞、肿瘤细胞及免疫细胞等。检测范围涉及细胞在不同培养条件（如温度、湿度、CO₂浓度）、处理因素（药物浓度梯度、基因编辑、物理刺激）下的生物学行为变化，适用于药物筛选、毒性评估、基因功能研究及疾病机制探索等领域。

细胞实验检测项目

1. 细胞活力检测：通过MTT、CCK-8等试剂评估细胞代谢活性。
2. 细胞增殖检测：采用BrdU标记、EdU染色或CFSE追踪法分析细胞分裂能力。
3. 细胞凋亡检测：通过Annexin V/PI双染、Caspase活性测定或TUNEL法检测程序性死亡。
4. 细胞周期检测：利用PI染色结合流式细胞术分析G0/G1、S、G2/M期分布。
5. 细胞迁移与侵袭实验：Transwell小室或划痕实验评估运动能力，基质胶模拟侵袭过程。
6. 细胞形态学观察：光学/荧光显微镜下观察结构变化，如伪足形成或膜完整性。
7. 细胞毒性检测：LDH释放实验量化膜损伤程度。
8. 基因与蛋白表达分析：qPCR、Western blot、免疫荧光技术检测特定分子水平。
9. 细胞代谢活性：ATP含量、活性氧（ROS）及乳酸脱氢酶（LDH）检测。
10. 细胞粘附与通讯：细胞贴壁率测定、荧光染料传递实验评估连接功能。

细胞实验检测仪器

1. 酶标仪（Multiskan GO/Thermo）：用于比色法（MTT、CCK-8）吸光度测定。
2. 流式细胞仪（BD FACSCelesta）：分析细胞周期、凋亡及表面标志物表达。
3. 倒置荧光显微镜（Olympus IX73）：观察细胞形态、荧光标记及迁移行为。
4. 实时定量PCR仪（Bio-Rad CFX96）：检测基因表达差异。
5. Western blot系统（Bio-Rad）：半定量分析蛋白表达水平。
6. 超低温离心机（Eppendorf 5430R）：用于细胞沉淀、蛋白/核酸提取。
7. CO₂培养箱（Thermo HERAcell 150i）：维持细胞恒温恒湿培养环境。
8. 活细胞成像系统（IncuCyte S3）：动态监测细胞增殖、迁移及凋亡过程。
9. 分光光度计（NanoDrop 2000）：定量核酸及蛋白样本浓度。
10. 自动细胞计数仪（Countstar IC1000）：快速评估细胞密度与存活率。

细胞实验检测方法

1. MTT法检测细胞活力：

   • 步骤：接种细胞于96孔板，处理24-48小时后加入MTT（0.5 mg/mL），孵育4小时，溶解甲臜结晶，测量570 nm吸光度。
   • 数据分析：计算抑制率（%）=（1-实验组OD/对照组OD）×100%。

2. 流式细胞术检测凋亡：

   • 步骤：收集细胞，Annexin V-FITC与PI避光染色15分钟，上机检测。
   • 参数设置：FITC通道（凋亡细胞）、PI通道（坏死细胞），双阴性为活细胞。

3. Transwell迁移实验：

   • 步骤：上室加入无血清细胞悬液，下室添加含趋化因子培养基，孵育24小时，结晶紫染色后计数穿透膜细胞数。

4. qPCR检测基因表达：

   • RNA提取：TRIzol法裂解细胞，氯仿分层，异丙醇沉淀RNA。
   • 逆转录：PrimeScript RT试剂盒合成cDNA。
   • 扩增：SYBR Green预混液进行PCR，2^−ΔΔCt法计算相对表达量。

5. Western blot检测蛋白表达：

   • 步骤：RIPA裂解液提取总蛋白，BCA法定量，SDS-PAGE电泳，转膜至PVDF，5%脱脂牛奶封闭，一抗/二抗孵育，ECL显影分析灰度值。

6. 细胞周期同步化与PI染色：

   • 同步化：血清饥饿法（G0/G1期）或诺考达唑处理（G2/M期阻滞）。
   • 染色：70%乙醇固定，RNase A消化RNA，PI（50 μg/mL）染色30分钟，流式检测红色荧光强度。

7. LDH释放实验：

   • 步骤：收集培养上清，与LDH检测试剂室温反应30分钟，测量490 nm吸光度，计算毒性率=（实验组-空白组）/（最大释放组-空白组）×100%。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。