流式检测细胞活力检测

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检测范围

流式细胞术检测细胞活力的适用范围包括：

1. 细胞类型：适用于贴壁细胞、悬浮细胞、原代细胞及各类肿瘤细胞系（如HeLa、HEK293、Jurkat等）。
2. 检测条件：涵盖正常培养条件、药物处理（如化疗药物、抑制剂）、基因编辑（如CRISPR敲除/过表达）及理化刺激（如缺氧、辐射、高温）后的细胞活力分析。
3. 样本状态：支持新鲜样本及短期冻存（4℃保存≤24小时）样本的检测。

检测项目

1. 活细胞比例：通过排除死细胞染料（如碘化丙啶PI、7-AAD）的荧光信号区分活细胞与死细胞。
2. 细胞凋亡与坏死：
   • 早期凋亡：Annexin V-FITC阳性/PI阴性细胞。
   • 晚期凋亡/坏死：Annexin V-FITC与PI双阳性细胞。
3. 线粒体膜电位（ΔΨm）：采用JC-1染料评估线粒体功能状态（红/绿荧光比值变化）。
4. 细胞增殖活性：通过CFSE或EdU标记检测细胞分裂能力。
5. 氧化应激水平：使用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧（ROS）含量。

检测仪器

1. 流式细胞仪：
   • 型号：BD FACSCanto™ II、Beckman Coulter CytoFLEX、Thermo Fisher Attune NxT。
   • 配置：配备488 nm蓝色激光（适用于FITC、PI、CFSE等染料）及640 nm红色激光（兼容APC、7-AAD等染料）。
2. 辅助设备：
   • 细胞培养箱（37℃, 5% CO₂）、离心机（转速范围：300–1500×g）、倒置荧光显微镜（预检样本状态）。
   • 数据分析软件：FlowJo v10、BD FACSDiva、Kaluza Analysis 2.1。

检测方法

1. 样本制备：
   • 收集细胞（贴壁细胞需胰酶消化），PBS洗涤2次，调整密度至1×10⁶ cells/mL。
   • 根据检测项目选择染色方案：
     • Annexin V/PI双染：加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI（20 μg/mL），避光孵育15分钟（室温）。
     • 线粒体膜电位检测：JC-1染料（终浓度2 μM）37℃孵育20分钟，PBS洗涤后上机。
2. 流式检测参数设置：
   • 阈值设定：前向散射（FSC）与侧向散射（SSC）排除碎片。
   • 荧光补偿：单染样本校正多色荧光重叠（如FITC vs PI）。
   • 数据采集：每样本至少采集10,000个细胞事件，保存为FCS 3.0格式。
3. 质控标准：
   • 阴性对照：未染色细胞用于背景荧光校正。
   • 阳性对照：使用H₂O₂诱导坏死或Staurosporine诱导凋亡的细胞验证检测体系。
   • 重复性要求：同一批次样本内CV值≤10%。

（注：具体试剂浓度及孵育时间可根据实验体系优化调整。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。