流式检测细胞自噬检测

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信息概要

流式检测细胞自噬检测标准基于细胞自噬过程中特定标志物的荧光信号变化进行定量分析，适用于哺乳动物细胞自噬水平的评估。该标准于2015年发布，现行有效版本为2020年修订版，未设定明确废止时间。检测涵盖自噬流动态监测、自噬关键蛋白表达量及溶酶体融合活性等核心指标。

检测项目

LC3-II/LC3-I比值测定, p62/SQSTM1降解率, 自噬体数量统计, 溶酶体pH值检测, ATG5-ATG12复合物表达, Beclin-1蛋白水平, ULK1磷酸化状态, 线粒体自噬特异性标志物检测, 自噬相关基因表达量分析, 自噬囊泡形成速率, mTOR信号通路活性, AMPK激活水平, 细胞存活率关联分析, 内质网应激诱导自噬评估, 线粒体膜电位变化, 自噬抑制因子验证, 溶酶体酶活性检测, 自噬流双向标记实验, 荧光报告基因系统验证, 三维自噬结构成像定量

检测范围

贴壁哺乳动物细胞系, 悬浮培养细胞, 原代分离细胞, 肿瘤细胞模型, 神经细胞模型, 免疫细胞样本, 干细胞分化样本, 基因编辑细胞株, 药物处理样本, 辐射暴露样本, 缺氧诱导样本, 病毒感染细胞, 线粒体自噬专用模型, 内质网自噬模型, 蛋白聚集诱导样本, 饥饿应激处理组, 溶酶体贮存病模型, 自噬缺陷型对照细胞, 转基因荧光报告系统, 类器官培养体系

检测方法

荧光标记串联探针法：利用mRFP-GFP-LC3双标系统区分自噬体与自噬溶酶体

流式细胞术定量：通过荧光强度统计LC3蛋白点状聚集比例

溶酶体抑制剂阻断实验：采用氯喹或巴菲霉素A1阻断自噬流进行动态比较

蛋白免疫印迹联用：定量LC3-II蛋白表达量与p62降解水平

荧光共振能量转移(FRET)：监测自噬相关蛋白相互作用实时变化

pH敏感性探针法：检测溶酶体内酸性环境变化反映自噬进程

流式细胞周期同步分析：关联自噬活性与细胞周期阶段

线粒体膜电位JC-1染色：评估线粒体自噬特异性进程

荧光纳米颗粒吞噬实验：量化自噬体形成速率

基因表达谱芯片分析：检测自噬相关通路基因表达变化

活细胞动态成像：采用共聚焦显微镜进行时间序列分析

流式细胞分选联用：分离特定自噬阶段细胞亚群进行深度分析

ATP含量检测：关联能量代谢水平与自噬激活程度

溶酶体酶活性检测：通过组织蛋白酶B/L活性测定评估自噬溶酶体功能

多色流式panel设计：同时检测自噬、凋亡及坏死相关指标

检测仪器

流式细胞分析仪, 共聚焦显微镜, 荧光酶标仪, 超速离心机, 蛋白质印迹系统, 实时荧光定量PCR仪, 细胞培养箱, 活细胞成像系统, 荧光分光光度计, 流式细胞分选仪, 多功能酶标仪, 激光扫描细胞成像仪, 纳米粒子追踪分析仪, 生物分子相互作用分析系统, 高通量细胞分析平台

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。