组织流式细胞检测

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组织流式细胞检测技术规范

一、检测范围

组织流式细胞检测适用于多种生物样本的分析，包括但不限于：

1. 实体组织：如肿瘤组织、淋巴结、脾脏、肝脏等。
2. 体外培养细胞：如原代细胞、细胞系或类器官。
3. 病理学样本：石蜡包埋组织（需经抗原修复处理）或冷冻保存组织。
4. 研究领域：免疫细胞分型、肿瘤微环境分析、细胞周期与凋亡研究、干细胞鉴定及细胞信号通路检测等。

二、检测项目

1. 细胞表面标志物检测
   • 免疫表型分析（如CD3、CD4、CD8、CD19、CD34等）。
   • 肿瘤标志物（如EpCAM、HER2、PD-L1）。
2. 胞内因子检测
   • 细胞因子（如IFN-γ、IL-2、TNF-α）。
   • 磷酸化蛋白（如p-AKT、p-ERK）。
3. 功能状态分析
   • 细胞周期（PI/DAPI染色）。
   • 细胞凋亡（Annexin V/PI双染）。
   • 活性氧（ROS）及线粒体膜电位检测。
4. 多色荧光分析：支持10色以上多参数同步检测。

三、检测仪器

1. 流式细胞仪型号
   • BD FACSAria III（配备405nm、488nm、561nm、640nm四激光系统）。
   • Beckman Coulter CytoFLEX S（支持13色荧光检测）。
2. 关键组件
   • 激光器：固态激光器，波长覆盖紫外至近红外。
   • 光学检测器：PMT（光电倍增管）及APD（雪崩光电二极管）。
   • 液流系统：70μm喷嘴，鞘液压力可调范围3-12 psi。
3. 配套软件
   • 数据采集：BD FACSDiva™、CytoExpert。
   • 数据分析：FlowJo v10.8、Kaluza Analysis 2.1。

四、检测方法

1. 样本制备
   • 组织解离：机械剪碎联合酶消化（胶原酶IV/DNase I，37℃孵育30分钟）。
   • 单细胞悬液过滤：70μm尼龙网筛去除碎片，PBS洗涤后调整细胞密度至1×10^6 cells/mL。
2. 抗体标记
   • 表面标志物：直接标记法（荧光偶联抗体，4℃避光孵育30分钟）。
   • 胞内标志物：先固定（4%多聚甲醛）、透膜（0.1% Triton X-100），再标记抗体。
3. 数据采集
   • 阈值设定：FSC/SSC排除碎片，收集10,000-50,000个细胞事件。
   • 荧光补偿：使用单染对照或补偿微球（UltraComp eBeads™）。
4. 数据分析
   • 门控策略：依次设门排除粘连体（FSC-A/FSC-H）、死细胞（DAPI+），再分层分析目标亚群。
   • 统计学处理：采用SPSS 26.0或GraphPad Prism 9.0进行差异显著性检验。

（注：操作需符合生物安全二级实验室标准，所有试剂避光保存于4℃。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。