质谱流式细胞检测

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质谱流式细胞检测技术分析

检测范围 质谱流式细胞检测（Mass Cytometry, CyTOF）是一种高通量单细胞分析技术，适用于免疫学、肿瘤学、干细胞研究、药理毒理学及临床诊断等领域。其检测范围涵盖以下样本类型：

1. 外周血单核细胞（PBMC）、骨髓、组织分离细胞等人体或动物源性样本；
2. 细胞系、原代培养细胞及稀有细胞亚群（如循环肿瘤细胞）；
3. 固定或冻存样本，兼容多色标记和长期实验设计。

检测项目 质谱流式细胞检测可同时分析单细胞水平超过50种参数，核心项目包括：

1. 表面标志物：免疫细胞分型（如CD3、CD4、CD8、CD19、CD56）、肿瘤标志物（如EpCAM、HER2）；
2. 胞内标志物：细胞因子（如IL-2、TNF-α）、磷酸化信号蛋白（如pSTAT3、pAKT）；
3. 功能状态标记：增殖标志物（Ki-67）、凋亡相关蛋白（Cleaved Caspase-3）；
4. 代谢与表观遗传标记：活性氧（ROS）、组蛋白修饰（H3K27me3）；
5. 药物靶点与效应分子：PD-1/PD-L1、CAR-T细胞标记物。

检测仪器 质谱流式细胞检测采用专用仪器系统，主要包括：

1. 质谱流式细胞仪（CyTOF）：如Fluidigm Helios™系统，配备高灵敏度飞行时间质谱（TOF）检测器；
2. 金属标签抗体：基于镧系元素同位素（如¹⁵³Eu、¹⁶⁶Er）标记的抗体探针，避免光谱重叠；
3. 激光与雾化系统：高频激光（Nd:YAG）实现单细胞电离，氩气雾化装置确保细胞悬液稳定进样；
4. 数据处理软件：包括Fluidigm CyTOF Software、Cytobank平台，用于原始信号解卷积和可视化分析。

检测方法 质谱流式细胞检测流程分为四个关键步骤：

1. 样本制备

   • 细胞悬液经密度梯度离心分离后调整至浓度1×10⁶ cells/mL；
   • 使用含铟（¹¹³In/¹¹⁵In）的互标准品（EQ Four Element Calibration Beads）校准仪器信号。

2. 抗体标记

   • 金属标签抗体按预设组合（Panel）孵育样本（4°C避光30分钟），结合胞内标志物需预先固定（4%多聚甲醛）和透膜处理（甲醇或皂苷）；
   • 采用Ir-Intercalator（¹⁹³Ir）标记DNA，区分活细胞与碎片。

3. 数据采集

   • 样本以雾化形式导入质谱流式细胞仪，单个细胞经激光电离后释放金属标签离子；
   • 质谱检测器按质量通道（75–210 m/z）记录离子信号，采集速率约500 cells/s。

4. 数据分析

   • 原始数据经归一化（基于校准微球信号）和降噪处理；
   • 使用t-SNE、UMAP等算法进行高维降维聚类，或通过FlowSOM/PhenoGraph识别细胞亚群；
   • 定量统计标志物表达强度（Median Intensity）及细胞亚群比例。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。