酶联荧光原位杂交检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围 酶联荧光原位杂交（Enzyme-Linked Fluorescence In Situ Hybridization, ELFISH）技术适用于多种生物样本的核酸靶标检测，包括：

1. 细胞学样本：如固定后的贴壁细胞、悬浮细胞及循环肿瘤细胞（CTC）。
2. 组织样本：石蜡包埋组织切片、冷冻组织切片及穿刺活检样本。
3. 微生物样本：细菌、真菌及病毒感染的宿主细胞或游离病原体。
4. 染色体与基因定位：用于特定染色体区域（如端粒、着丝粒）或基因位点的空间定位分析。

检测项目 ELFISH技术可针对以下核酸靶标进行特异性检测：

1. 基因扩增与缺失：如HER2、EGFR、MYC等癌基因或抑癌基因的拷贝数变异。
2. 染色体异常：非整倍体（如21号染色体三体）、易位（如BCR-ABL融合基因）及微卫星不稳定。
3. 病原体鉴定：如HPV、EBV、结核分枝杆菌等病原体的DNA或RNA检测。
4. 表观遗传标记：甲基化DNA区域或非编码RNA的空间表达分析。

检测仪器

1. 荧光显微镜：配备多通道滤光片系统（如DAPI/FITC/TRITC/Cy5），支持多色荧光信号同步采集。
2. 杂交仪：控温精度±0.5°C，支持程序化变温杂交（如37°C预杂交→42°C严格杂交）。
3. 酶标分析系统：用于酶联信号放大后的光学密度（OD值）定量，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）底物检测模块。
4. 图像分析软件：如MetaSystems或NIS-Elements，支持靶点自动计数、荧光强度分析及空间共定位计算。

检测方法

1. 样本预处理：
   • 细胞/组织固定：4%多聚甲醛或甲醇-乙酸（3:1）固定10-15分钟。
   • 透化处理：0.1% Triton X-100或蛋白酶K（20 μg/mL）孵育10分钟，增强探针穿透性。
2. 探针制备与标记：
   • 使用地高辛（DIG）或生物素标记的DNA/RNA探针，通过缺口平移法或PCR合成。
   • 酶联信号放大：链霉亲和素-HRP或抗地高辛抗体-AP复合物与探针结合，催化荧光底物（如Tyramide-FITC）沉积。
3. 杂交与洗涤：
   • 探针与样本共孵育（42°C，4-16小时），严格洗涤（2×SSC + 50%甲酰胺，42°C）去除未结合探针。
4. 信号检测与分析：
   • 荧光显微镜下观察靶点信号（如绿色荧光对应FITC，红色对应Cy3），结合图像软件量化荧光强度与空间分布。
   • 阳性判定标准：靶点信号强度高于背景3倍，且与阴性对照无交叉反应。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。