数字荧光原位杂交检测

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数字荧光原位杂交检测技术规范

检测范围 数字荧光原位杂交（D-FISH）技术适用于多种生物样本的基因组及病原体检测，包括：

1. 细胞样本：外周血淋巴细胞、骨髓细胞、肿瘤细胞及培养细胞等。
2. 组织样本：福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片、新鲜冷冻组织切片及穿刺活检样本。
3. 应用领域：肿瘤遗传学（如实体瘤和血液肿瘤）、产前诊断（染色体非整倍体）、病原体感染（如病毒整合位点检测）及生殖遗传学（胚胎植入前筛查）。

检测项目

1. 染色体数目异常：检测特定染色体非整倍体（如21号染色体三体）。
2. 基因扩增/缺失：靶向分析致癌基因（如HER2、EGFR、MYC）或抑癌基因（如TP53、RB1）拷贝数变异。
3. 基因重排与融合：识别染色体易位（如BCR-ABL1、ALK-EML4）及微缺失综合征（如22q11.2缺失）。
4. 病原体检测：定位病毒（如HPV、EBV）或细菌基因组在宿主细胞内的整合位点。

检测仪器

1. 荧光显微镜系统：配备多波段滤光片的高分辨率显微镜（如Olympus BX63、Zeiss Axio Imager），支持DAPI、FITC、Cy3、Texas Red等多色荧光通道。
2. 图像采集与分析系统：高灵敏度CCD相机（如Hamamatsu ORCA-Flash4.0）及专用分析软件（如Metafer、Case Data Manager）。
3. 自动化杂交设备：如Abbott Molecular Hybridization Oven或ThermoBrite Elite，实现温度与时间精准控制。
4. 辅助设备：离心机（样本预处理）、恒温水浴箱（探针变性）及暗室（荧光信号保存）。

检测方法

1. 样本制备
   • 细胞样本：采用低渗液（0.075M KCl）破裂红细胞，甲醇-冰醋酸固定后滴片。
   • 组织样本：FFPE切片经脱蜡、蛋白酶K消化（20 μg/mL，37℃孵育30分钟）及梯度乙醇脱水。
2. 探针杂交
   • 使用商业化荧光探针（如Vysis或MetaSystems产品），与目标DNA序列互补标记（Cy3/FITC）。
   • 探针与样本DNA共变性（73℃, 5分钟），随后37℃避光杂交12-16小时。
3. 洗涤与信号增强
   • 严格洗涤（2×SSC/0.3% NP-40，73℃, 2分钟）去除未结合探针。
   • 应用抗褪色剂（如Vectashield含DAPI）封片，减少荧光淬灭。
4. 图像分析与判读
   • 通过多通道荧光显微镜捕获图像，软件自动计数荧光信号并计算信噪比。
   • 阳性标准：≥10%细胞显示预期信号模式（如HER2扩增：>2拷贝/核；BCR-ABL1融合：红绿分离信号）。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。