细胞荧光原位杂交检测

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细胞荧光原位杂交（FISH）检测技术概述

1. 检测范围

细胞荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）技术适用于以下领域：

• 医学检测：肿瘤遗传学（如实体瘤和血液系统肿瘤）、遗传性疾病（如唐氏综合征）、产前诊断及生殖细胞异常分析。
• 生物学研究：染色体结构分析、基因定位、微生物鉴定及基因组进化研究。
• 样本类型：包括细胞涂片、石蜡包埋组织切片、新鲜冰冻组织及循环肿瘤细胞（CTC）等。

2. 检测项目

FISH技术可检测的靶标包括：

• 染色体数目异常：如21号染色体三体（唐氏综合征）、性染色体非整倍体等。
• 基因扩增/缺失：例如HER2基因扩增（乳腺癌）、EGFR基因扩增（肺癌）、TP53基因缺失（多种实体瘤）。
• 基因融合/易位：如BCR-ABL融合基因（慢性粒细胞白血病）、ALK重排（非小细胞肺癌）。
• 端粒与着丝粒分析：评估染色体稳定性及细胞衰老状态。
• 微生物检测：如病毒DNA整合位点分析（如HPV感染相关宫颈癌）。

3. 检测仪器

FISH检测需依赖以下核心设备：

• 荧光显微镜：配备特定激发/发射滤光片（如DAPI、FITC、Texas Red通道），用于观察荧光信号。
• 杂交仪：提供恒温环境（如37°C或42°C）以控制探针与靶DNA的杂交条件。
• 图像分析系统：如MetaSystems或Leica配套软件，用于信号定量与核型分析。
• 显微操作设备：用于样本定位及多靶标区域标记。
• PCR仪（可选）：用于探针扩增或样本DNA预扩增。

4. 检测方法

4.1 样本制备

• 细胞固定：采用甲醇-冰醋酸（3:1）或甲醛固定样本，保留细胞形态及核酸完整性。
• 预处理：使用蛋白酶K消化细胞质蛋白，暴露靶DNA；高温（80°C）变性使DNA双链解旋。

4.2 探针标记

• 选择特异性DNA探针（如着丝粒探针、位点特异性探针），标记荧光染料（如FITC、Cy3、Spectrum Orange）。

4.3 杂交与洗涤

• 将探针与样本共孵育（4-16小时，37°C），使探针与互补序列结合。
• 采用梯度盐溶液（SSC缓冲液）洗涤，去除未结合探针，降低背景信号。

4.4 信号观察与分析

• 封片后通过荧光显微镜观察，统计荧光信号数量及位置。
• 判定标准：依据信号数量（如双信号为正常，单信号提示缺失）及分布（如融合信号提示基因易位）。

（注：实验需设置阳性和阴性对照，确保结果可靠性。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。