荧光原位免疫杂交检测

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荧光原位免疫杂交检测技术概述

一、检测范围 荧光原位免疫杂交（Fluorescence In Situ Immunohybridization, FISH-I）技术适用于细胞或组织样本中特定核酸序列与蛋白质分子的共定位分析。其检测范围涵盖：

1. 疾病诊断：肿瘤基因突变（如HER2、EGFR）、染色体异常（如21三体综合征）、病原体核酸（HPV、EBV）检测。
2. 基础研究：基因表达定位、蛋白质-DNA/RNA相互作用、细胞信号通路可视化。
3. 临床病理学：组织切片中特定蛋白标志物（如PD-L1）与基因扩增的同步检测。

二、检测项目

1. 核酸靶标：DNA序列（如基因缺失、重复）、RNA分子（mRNA、lncRNA）。
2. 蛋白质靶标：细胞表面受体（如CD20）、细胞内信号分子（如p53、Ki-67）。
3. 复合检测：核酸与蛋白质共定位分析（如病毒核酸与宿主蛋白的相互作用）。

三、检测仪器

1. 荧光显微镜：配备多波段滤光片的倒置荧光显微镜（如Olympus IX83），支持DAPI、FITC、TRITC、Cy5等多通道荧光信号采集。
2. 杂交仪：可控温控湿的自动化杂交系统（如Abbott StatSpin），确保探针与样本高效结合。
3. 成像分析系统：高分辨率CCD相机（如Hamamatsu ORCA-Flash4.0）配合图像分析软件（如MetaMorph），实现定量信号分析。

四、检测方法

1. 样本制备：
   • 组织切片或细胞爬片经固定（4%多聚甲醛）、透化（0.1% Triton X-100）处理。
   • 蛋白酶K消化（针对石蜡包埋样本）以暴露靶核酸。
2. 探针与抗体标记：
   • 核酸探针：荧光标记的DNA/RNA探针（如Cy3-HER2探针）与靶序列互补杂交。
   • 蛋白检测：一抗（如抗-PD-L1单克隆抗体）孵育后，结合荧光标记二抗（如Alexa Fluor 488）。
3. 杂交与洗涤：
   • 探针与抗体同步孵育（37℃, 16小时），严格洗脱（2×SSC缓冲液）去除非特异性结合。
4. 信号放大与成像：
   • 酪胺信号放大（TSA）技术增强弱信号，共聚焦显微镜采集多通道图像，软件合成叠加分析。
5. 结果判读：
   • 阳性信号定义为细胞核/质内特异性荧光斑点或连续信号，阈值依据阴性对照与背景信号校准。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。