原位杂交实验检测

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检测范围 原位杂交实验的检测范围涵盖多种生物样本，包括但不限于动物或植物组织切片（如石蜡包埋切片、冷冻切片）、细胞培养物（贴壁或悬浮细胞）、胚胎样本以及微生物群落。该技术适用于检测特定核酸序列（DNA或RNA）在细胞或组织中的空间分布及表达水平，广泛应用于遗传学、发育生物学、病理学及微生物学等领域的研究。

检测项目 原位杂交实验的主要检测项目包括：

1. mRNA定位与表达分析：检测特定基因的mRNA在组织或细胞中的分布及表达丰度，例如肿瘤标志物或发育相关基因的表达模式。
2. 非编码RNA检测：如miRNA、lncRNA等非编码RNA的细胞定位研究。
3. 病原体核酸鉴定：检测病毒（如HPV、EBV）、细菌或寄生虫的DNA/RNA在宿主组织中的存在及感染部位。
4. 染色体结构分析：用于荧光原位杂交（FISH）技术，定位基因在染色体上的位置或检测染色体异常（如缺失、扩增）。

检测仪器 原位杂交实验的核心仪器包括：

1. 荧光显微镜或共聚焦显微镜：用于荧光标记探针的信号采集与分析，支持多色荧光检测。
2. 原位杂交仪：自动化控制温度与湿度的设备（如HybEZ或ThermoBrite），确保杂交反应条件稳定。
3. 显微成像系统：配备高分辨率摄像头及图像分析软件（如NIS-Elements或ZEN），用于信号定量与图像处理。
4. 辅助设备：PCR仪（探针制备）、恒温箱（样本预处理）、切片机（组织切片制备）及离心机（样本处理）。

检测方法

1. 样品制备

   • 组织样本经4%多聚甲醛固定后，进行石蜡包埋或冷冻切片（厚度4-10 μm）；细胞样本通过离心或贴壁培养后固定。
   • 石蜡切片需脱蜡、水化处理，冷冻切片直接进行透化（0.1% Triton X-100处理10分钟）。

2. 探针设计与标记

   • 根据目标核酸序列设计特异性探针（DNA、RNA或锁核酸探针），采用荧光染料（如FITC、Cy3）或地高辛/生物素标记。
   • 探针通过体外转录（RNA探针）或化学合成（DNA探针）制备，浓度通常为1-10 ng/μL。

3. 杂交与洗涤

   • 将探针与杂交缓冲液（含甲酰胺、SSC缓冲液）混合，滴加至样本表面，覆盖盖玻片后置于湿盒中，42-65°C孵育4-16小时（依据探针类型调整）。
   • 杂交后依次用不同浓度SSC缓冲液（2×至0.1×）洗涤，去除未结合探针。

4. 信号检测

   • 荧光原位杂交（FISH）：直接观察荧光信号，或通过抗体放大（如地高辛标记探针结合抗地高辛-FITC抗体）。
   • 显色原位杂交（CISH）：采用辣根过氧化物酶（HRP）标记探针，通过DAB显色反应生成可见沉淀。

5. 结果分析

   • 显微镜下观察信号定位（细胞核、细胞质或特定亚细胞结构），结合图像分析软件定量信号强度。
   • 需设置阳性和阴性对照（如无探针样本或正义链探针）以确保特异性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。