荧光原位杂交实验检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

荧光原位杂交实验检测技术说明

1. 检测范围 荧光原位杂交（Fluorescence in Situ Hybridization, FISH）技术适用于多种生物样本的核酸序列定位分析，包括但不限于：

• 样本类型：实体组织切片（如肿瘤组织）、细胞涂片（血液、骨髓、脱落细胞）、石蜡包埋样本及培养细胞等。
• 检测对象：特定DNA序列（如基因扩增、缺失、易位）或RNA分子，用于分析染色体数目异常（如非整倍体）、基因融合（如BCR-ABL）、微缺失综合征（如22q11.2缺失）及肿瘤相关基因状态（如HER2扩增）。

2. 检测项目 FISH技术可针对以下临床及科研需求开展检测：

• 染色体异常：检测非整倍体（如21号染色体三体）、微缺失/微重复（如DiGeorge综合征）。
• 肿瘤标志物：实体瘤中HER2、EGFR基因扩增，血液肿瘤中PML-RARA、IGH重排等融合基因。
• 病原体检测：病毒DNA/RNA在宿主细胞内的定位（如HPV感染）。
• 基因表达研究：特定mRNA在组织或细胞中的空间分布。

3. 检测仪器 FISH实验需依赖以下核心设备：

• 荧光显微镜：配备多波段滤光片（如DAPI、FITC、TRITC、Cy5通道），支持高分辨率荧光成像。
• 杂交仪：用于控制探针与样本DNA的杂交条件（温度、时间）。
• 图像分析系统：如MetaSystems或BioView全自动扫描平台，用于信号捕获与定量分析。
• 辅助设备：恒温培养箱、离心机、移液器及暗室成像设备。

4. 检测方法 步骤1：样本制备

• 固定：采用甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织切片，保持核酸完整性。
• 通透处理：蛋白酶K消化细胞质蛋白，暴露靶核酸序列。
• 变性：通过甲酰胺高温处理（70-80℃）使DNA双链解旋。

步骤2：探针杂交

• 探针选择：标记荧光染料的单链DNA探针（如SpectrumOrange/SpectrumGreen）与靶序列互补。
• 杂交条件：探针与样本在37-42℃避光孵育4-16小时，促进特异性结合。

步骤3：洗脱与复染

• 严格洗涤：使用SSC缓冲液（不同浓度）去除未结合探针，降低背景信号。
• 复染：DAPI染色细胞核，辅助定位荧光信号。

步骤4：结果判读

• 信号分析：通过荧光显微镜观察靶位点的荧光信号强度、数量及分布。
• 定量标准：依据阳性信号阈值（如HER2扩增≥2.0信号比）判定结果，结合阴性对照排除假阳性。

（注：实际检测参数需根据探针类型及样本特性优化调整。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。