耐药突变位点检测

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检测范围 耐药突变位点检测主要针对临床常见病原体的耐药相关基因突变，包括细菌、病毒、真菌及寄生虫等。检测覆盖以下病原体类型：

1. 细菌：结核分枝杆菌（MTB）、金黄色葡萄球菌（MRSA）、肺炎克雷伯菌（碳青霉烯耐药）等。
2. 病毒：人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）等。
3. 真菌：白色念珠菌、曲霉菌（唑类耐药）。
4. 寄生虫：疟原虫（氯喹耐药相关基因突变）。

检测项目 检测聚焦于已知与耐药性密切相关的基因及位点，具体包括：

1. 结核分枝杆菌：rpoB（利福平耐药）、katG（异烟肼耐药）、embB（乙胺丁醇耐药）。
2. HIV：逆转录酶基因（K103N、M184V）、蛋白酶基因（D30N、L90M）。
3. HBV：逆转录酶区突变（rtM204V/I、rtL180M）。
4. MRSA：mecA基因（甲氧西林耐药）。
5. 疟原虫：Pfcrt（氯喹耐药）、pfmdr1（多药耐药）。

检测仪器 检测采用高通量、高灵敏度的分子生物学设备，包括：

1. 实时荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Roche LightCycler 480）：用于靶向基因突变的快速筛查。
2. 基因测序仪（如ABI 3500系列、Illumina MiSeq）：用于Sanger测序或高通量测序（NGS），解析耐药突变位点。
3. 自动化核酸提取仪（如Qiagen QIAcube、MagNA Pure 96）：确保样本核酸提取的标准化与高效性。
4. 数字PCR系统（如Bio-Rad QX200）：用于低频耐药突变的精准定量。

检测方法

1. 样本处理与核酸提取：

   • 临床样本（血液、痰液、组织等）经离心、裂解后，使用磁珠法或柱膜法提取病原体DNA/RNA。
   • RNA病毒（如HIV、HCV）需通过逆转录酶合成cDNA。

2. 靶向扩增与突变检测：

   • 实时荧光PCR：设计特异性探针（如TaqMan探针），通过熔解曲线分析或探针荧光信号差异识别突变位点。
   • 多重PCR扩增：针对多个耐药基因设计引物，结合毛细管电泳或微流控芯片进行分型。

3. 测序分析：

   • Sanger测序：对PCR产物直接测序，通过序列比对软件（如Geneious、CLC Genomics）识别突变位点。
   • 高通量测序（NGS）：构建耐药基因Panel文库，通过Illumina或Ion Torrent平台进行深度测序，检测低频突变（灵敏度达1%）。

4. 数据分析与报告生成：

   • 使用生物信息学工具（如SnpEff、ANNOVAR）注释突变位点的临床意义。
   • 结合国际耐药数据库（如Stanford HIVDB、ReSeqTB）生成耐药性解读报告。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。