遗传毒性微核检测

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检测范围

遗传毒性微核检测是一种广泛应用于评估化学物质、药物、环境污染物及辐射等外源性因素对遗传物质损伤的标准化方法。该检测适用于体外培养细胞（如人淋巴细胞、CHO细胞、V79细胞等）、动物模型（如小鼠骨髓细胞、外周血细胞）以及职业暴露人群的生物监测。其主要应用领域包括药物开发中的遗传毒性筛选、环境毒理学研究、食品安全评估（如食品添加剂及农药残留检测）以及职业健康风险评估等。

检测项目

1. 微核率（Micronucleus Frequency）：统计受试样本中微核的形成比例，反映染色体断裂或纺锤体功能异常导致的遗传物质损伤程度。
2. 核分裂指数（Nuclear Division Index, NDI）：评估细胞增殖活性，判断受试物是否干扰细胞周期进程。
3. 细胞毒性评估：通过细胞存活率或相对增殖率（如MTT法或台盼蓝染色法）确定受试物的非遗传毒性效应浓度范围。
4. 细胞凋亡率（可选）：结合荧光染色技术（如Hoechst 33342）检测凋亡细胞比例，区分微核形成与凋亡相关DNA断裂。

检测仪器

1. 倒置光学显微镜：用于观察微核形态及计数，配备100×油镜及图像采集系统（如CCD相机）。
2. 流式细胞仪：适用于高通量微核自动化分析，通过荧光标记（如抗着丝粒抗体）区分微核来源（染色体断裂或整条染色体丢失）。
3. 细胞培养箱：提供恒温（37°C）、恒湿及5% CO₂环境，维持细胞体外培养条件。
4. 离心机与细胞计数器：用于样本制备及细胞密度标准化。
5. 全自动染色机（可选）：标准化吉姆萨（Giemsa）或荧光染色流程，减少人为误差。

检测方法

1. 样本制备：
   • 体外细胞：采集人外周血淋巴细胞或特定细胞系，经RPMI 1640培养基培养并同步化（如细胞松弛素B阻断胞质分裂）。
   • 体内样本：处死实验动物后提取骨髓细胞或外周血，制备单细胞悬液。
2. 染毒处理：设置不同浓度受试物组、溶剂对照组及阳性对照组（如丝裂霉素C或环磷酰胺），暴露时间通常为24-72小时（依据细胞类型调整）。
3. 细胞复苏与固定：离心去除培养液后，低渗处理（0.075 M KCl）膨胀细胞膜，甲醇-冰醋酸（3:1）固定细胞结构。
4. 制片与染色：细胞悬液滴片后经吉姆萨染色（或荧光染料如Acridine Orange），干燥后封片待检。
5. 镜检分析：每样本随机观察至少1000个双核细胞，记录含微核的细胞数，按公式计算微核率（微核率=微核细胞数/总双核细胞数×1000‰）。
6. 数据处理：结合统计学方法（如卡方检验或t检验）分析组间差异，评估受试物的遗传毒性潜能。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。