裸鼠成瘤细胞量检测

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检测范围

本实验选用BALB/c-nu裸鼠（雌雄各半，68周龄，体重1822 g），接种人源肿瘤细胞系（如HepG2肝癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞），实验分为对照组及3个处理组，每组5只裸鼠。检测周期为细胞接种后1~4周，重点监测肿瘤形成及生长动态。

检测项目

1. 肿瘤体积：通过长径（L）和短径（W）计算肿瘤体积。
2. 肿瘤重量：解剖后直接称量肿瘤组织湿重。
3. 细胞活力：通过台盼蓝染色或ATP生物发光法检测肿瘤细胞存活率。
4. 增殖标志物：检测Ki-67、PCNA等增殖相关蛋白表达水平。
5. 组织病理学分析：评估肿瘤组织坏死、血管生成及侵袭情况。

检测仪器

1. 肿瘤体积测量：数字游标卡尺（精度0.01 mm）或小动物活体成像系统（如IVIS Spectrum）。
2. 肿瘤称重：精密电子天平（精度0.1 mg，型号如Sartorius CPA225D）。
3. 细胞活力检测：流式细胞仪（如BD FACSCalibur）或酶标仪（如BioTek Synergy H1）。
4. 增殖标志物分析：免疫组化全自动染色系统（如Leica BOND-III）或荧光定量PCR仪（如ABI QuantStudio 5）。
5. 病理学检测：组织切片机（Leica RM2235）及光学显微镜（Nikon Eclipse Ci-L）。

检测方法

1. 肿瘤体积监测

   • 接种后每周2次测量肿瘤长径（L）和短径（W），按公式 �=�×�22V=2L×W2​ 计算体积，持续至实验终点。

2. 肿瘤重量测定

   • 麻醉处死裸鼠后，手术剥离肿瘤组织，生理盐水冲洗后滤纸吸干，立即用电子天平称重并记录。

3. 细胞活力检测

   • 台盼蓝法：取肿瘤单细胞悬液，与0.4%台盼蓝溶液按1:1混合，血细胞计数板统计活细胞比例。
   • ATP检测：使用CellTiter-Glo试剂裂解细胞，酶标仪测定发光值（RLU）反映ATP含量。

4. 增殖标志物检测

   • 免疫组化：石蜡切片经抗原修复后，Ki-67一抗（1:200）孵育，DAB显色，显微镜下定量阳性细胞占比。
   • qPCR：提取肿瘤RNA并反转录为cDNA，SYBR Green法检测PCNA mRNA相对表达量。

5. 病理学分析

   • 肿瘤组织经4%多聚甲醛固定、石蜡包埋后，切片（4 μm）进行HE染色，显微镜下观察组织坏死区域及边缘侵袭情况，图像分析软件（ImageJ）定量分析。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。