人鼠细胞融合检测

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检测范围 人鼠细胞融合检测主要应用于生物医学研究及药物开发领域，涵盖以下范围：

1. 细胞类型：包括人源细胞（如HEK293、HeLa）与鼠源细胞（如NIH/3T3、CHO-K1）的融合实验。
2. 样本类型：细胞样本（体外培养）、组织样本（如异种移植模型）及生物制品（如抗体药物生产中的交叉污染检测）。
3. 检测环境：实验室研究（基础细胞生物学）、生物制药生产中的质量控制及基因治疗安全性评估。

检测项目

1. 细胞融合效率：量化融合细胞占初始细胞群的比例。
2. 细胞存活率：评估融合过程对细胞活性的影响。
3. 基因表达分析：检测融合细胞中人源与鼠源基因的共表达情况（如荧光报告基因、特定蛋白编码基因）。
4. 细胞功能验证：包括增殖能力、代谢活性（如ATP水平）及信号通路响应。
5. 异源蛋白定位：观察融合细胞中人/鼠来源蛋白的亚细胞定位（如膜蛋白、胞质蛋白）。

检测仪器

1. 流式细胞仪：用于分析融合细胞的表面标记物（如人/鼠特异性抗体标记）及荧光信号。
2. 激光共聚焦显微镜：高分辨率成像融合细胞的形态及荧光标记蛋白的空间分布。
3. 实时定量PCR仪（RT-qPCR）：定量检测人源与鼠源特异性基因的表达水平。
4. 酶标仪：测定细胞活力相关指标（如CCK-8法、LDH释放试验）。
5. Western blot系统：验证融合细胞中人/鼠来源蛋白的表达及翻译后修饰。

检测方法

1. 细胞融合诱导

   • 化学诱导法：使用聚乙二醇（PEG）处理人鼠混合细胞（浓度50%-60%，作用时间2-5分钟）。
   • 电融合法：通过短脉冲电场（参数：电压100-500 V/cm，脉宽10-100 μs）促进细胞膜通透性。

2. 样本制备

   • 融合后细胞经PBS洗涤，离心（1200 rpm，5分钟）去除残留诱导剂。
   • 活细胞用Calcein-AM/PI双染，死细胞通过台盼蓝排除法标记。

3. 流式细胞术检测

   • 人源细胞标记FITC-抗人CD47抗体，鼠源细胞标记PE-抗鼠H-2Kd抗体。
   • 双阳性细胞（FITC+PE+）判定为融合细胞，占比通过FlowJo软件分析。

4. 共聚焦显微镜成像

   • 固定融合细胞后，分别用Hoechst 33342（核定位）、人源线粒体染料MitoTracker Red及鼠源膜蛋白抗体（Cy5标记）染色。
   • Z-stack三维成像确认亚细胞结构共定位。

5. 基因表达验证

   • 提取总RNA后，设计人特异性引物（如人GAPDH）和鼠特异性引物（如鼠β-actin），RT-qPCR检测阈值循环数（Ct值）。
   • 融合细胞中人鼠基因表达比例通过ΔΔCt法计算。

6. 质量控制

   • 每组实验设置阴性对照（未融合细胞）和阳性对照（已知融合效率的标准品）。
   • 数据重复3次，统计方法采用Student’s t-test或ANOVA分析显著性差异。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。