小鼠妊娠模型检测

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检测范围 本研究采用ICR品系雌性小鼠（8-10周龄），妊娠周期为0-21天（以交配后阴道栓出现为妊娠第0天）。检测覆盖妊娠早期（1-7天）、中期（8-14天）及晚期（15-21天），重点关注胚胎着床、胎盘形成及胎儿发育关键阶段的生理变化。实验组与对照组各20只，确保统计学显著性。

检测项目

1. 激素水平：包括血清孕酮（P4）、雌激素（E2）及小鼠绒毛膜促性腺激素（mCG）浓度，评估妊娠维持相关内分泌变化。
2. 胚胎发育指标：记录胚胎数量、重量、体长及胎盘直径，分析妊娠成功率及胎儿生长状态。
3. 子宫形态学：测量子宫重量、血管密度及子宫内膜厚度，评估妊娠期子宫重塑。
4. 组织病理学：通过HE染色观察子宫内膜腺体结构及胚胎着床位点；免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）表达，评估细胞增殖活性。
5. 分子标志物：检测胎盘组织中VEGF、IGF-1基因表达，分析血管生成与胎儿营养供应机制。

检测仪器

1. 激素检测：全自动酶标仪（BioTek Synergy H1）配合ELISA试剂盒（Abcam, 货号ab178013）。
2. 胚胎观测：体视显微镜（Leica M205C）搭配成像系统（LAS X软件），精度达0.01 mm。
3. 超声监测：高频小动物超声成像仪（VisualSonics Vevo 3100），探头频率22-55 MHz，实时观测胚胎心跳及发育动态。
4. 组织分析：石蜡切片机（Leica RM2235）、荧光显微镜（Olympus BX53）及图像分析软件（Image-Pro Plus 6.0）。
5. 分子检测：实时荧光定量PCR仪（Applied Biosystems 7500）、分光光度计（NanoDrop 2000）用于RNA纯度及浓度测定。

检测方法

1. 样本采集：

   • 血液样本：妊娠第3、7、14、21天经尾静脉采血，离心（3000 rpm, 15 min）分离血清，-80℃保存。
   • 组织样本：颈椎脱臼处死后解剖子宫，分离胚胎及胎盘，称重后分别固定于4%多聚甲醛或液氮速冻。

2. ELISA检测： 按试剂盒标准流程操作，血清稀释比例1:5，450 nm波长测定吸光度，标准曲线法计算激素浓度。

3. 超声活体监测： 小鼠麻醉后（异氟烷吸入），腹部剃毛并涂抹超声耦合剂，横向/纵向扫描子宫角，记录胚胎数量及心搏频率。

4. 组织学处理：

   • 固定子宫组织24 h后脱水、石蜡包埋，连续切片厚度4 μm，HE染色观察组织结构。
   • 免疫组化采用SP法：一抗PCNA（1:200, Cell Signaling Technology 2586），DAB显色，苏木素复染。

5. qPCR分析：

   • TRIzol法提取胎盘总RNA，逆转录为cDNA（PrimeScript RT Kit, Takara）。
   • 引物序列：VEGF-F: 5&39;-CAGGCTGCTGTAACGATGAAG-3&39;，R: 5&39;-ATCTGCATGGTGATGTTTGCT-3&39;；循环条件：95℃ 30 s，40 cycles（95℃ 5 s，60℃ 34 s）。

6. 数据分析： 实验数据以均值±标准差表示，采用SPSS 26.0进行t检验或单因素方差分析（ANOVA），P<0.05判定为显著性差异。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。