细胞免疫检测

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检测范围

细胞免疫检测主要应用于以下领域：

1. 免疫缺陷疾病：如HIV/AIDS、先天性免疫缺陷等，评估CD4+ T细胞数量及功能。
2. 自身免疫性疾病：如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮，检测异常活化的T细胞或自身反应性淋巴细胞。
3. 肿瘤免疫：监测肿瘤微环境中免疫细胞浸润情况（如TILs），评估免疫检查点抑制剂（如PD-1/PD-L1）疗效。
4. 移植免疫：检测供受体HLA匹配度及移植后T细胞亚群动态，预防移植物抗宿主病（GVHD）或排斥反应。
5. 感染性疾病：如结核、病毒性肝炎，通过特异性T细胞应答（如IFN-γ释放试验）辅助诊断。

检测项目

1. T细胞亚群分析：包括CD3+（总T细胞）、CD4+（辅助T细胞）、CD8+（细胞毒性T细胞）及其比值，评估免疫状态。
2. NK细胞检测：CD16+/CD56+细胞计数及杀伤活性，反映先天抗肿瘤/抗病毒能力。
3. 淋巴细胞增殖试验：采用³H-TdR或CFSE染色，检测T/B细胞对丝裂原（如PHA）或抗原的增殖响应。
4. 细胞因子检测：如IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α的浓度或分泌细胞数量（ELISPOT）。
5. 免疫表型分析：活化标记（如CD25、HLA-DR）、耗竭标记（如PD-1、TIM-3）及记忆T细胞（CD45RO/RA）。
6. HLA分型：通过PCR-SSP或流式细胞术确定HLA-I/II类抗原，用于移植配型。

检测仪器

1. 流式细胞仪：多色荧光分析细胞表面/胞内分子，支持高精度免疫分型及功能检测。
2. 酶标仪：用于ELISA定量细胞因子，或读取ELISPOT板的斑点形成细胞数。
3. 实时荧光定量PCR仪：检测免疫相关基因（如FoxP3、Granzyme B）的mRNA表达水平。
4. 电化学发光分析仪：高灵敏度定量血清中可溶性免疫标志物（如sCD25）。
5. 倒置荧光显微镜：观察免疫荧光标记的细胞形态及定位（如Th1/Th2细胞染色）。
6. 细胞代谢分析系统：通过Seahorse分析仪评估免疫细胞的能量代谢状态。

检测方法

1. 流式细胞术：

   • 步骤：分离外周血单个核细胞（PBMCs），荧光抗体标记靶分子（如CD4-PE/Cy7），上机获取数据，用FlowJo分析亚群比例及活化状态。
   • 应用：T/B/NK细胞分型、胞内细胞因子染色（ICS）、钙离子流检测。

2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：

   • 步骤：包被特异性抗体，加入待测样本（血清/培养上清），酶标二抗显色，测定OD值计算浓度。
   • 应用：定量IL-10、TGF-β等细胞因子。

3. 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）：

   • 步骤：PVDF膜包被捕获抗体，加入PBMCs及抗原刺激，显色后计数分泌IFN-γ或IL-4的斑点形成细胞。
   • 应用：评估抗原特异性T细胞应答。

4. 淋巴细胞转化试验（LTT）：

   • 步骤：PBMCs与PHA/ConA共培养72小时，³H-TdR掺入法或CCK-8检测增殖活性。

5. 免疫荧光染色：

   • 步骤：固定细胞后，使用CD3-FITC/CD8-APC双标，DAPI复染核，镜下观察T细胞亚群分布。

6. 单细胞测序：

   • 步骤：分选单个T细胞，构建转录组文库，分析免疫细胞异质性及克隆扩增。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。