蛋白降解检测

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蛋白降解检测

检测范围

蛋白降解检测适用于生物制药、食品工业、医学研究及环境科学等领域，涵盖以下样本类型：

1. 生物制药：重组蛋白药物、抗体类药物、疫苗等生物制品的稳定性分析。
2. 食品工业：肉类、乳制品及植物蛋白类食品的保质期评估与质量控制。
3. 医学研究：疾病相关蛋白（如癌症标志物、神经退行性疾病相关蛋白）的降解机制研究。
4. 环境科学：微生物或酶制剂在环境中的蛋白质降解能力分析。

检测项目

1. 总蛋白含量测定：通过BCA法、Bradford法或Lowry法量化样本中总蛋白浓度。
2. 降解产物分析：检测多肽、氨基酸等降解产物的种类与含量（如HPLC-MS联用技术）。
3. 酶活性测定：评估蛋白酶、泛素-蛋白酶体系统（UPS）或自噬溶酶体途径的活性。
4. 结构变化分析：通过圆二色谱（CD）、荧光光谱或SDS-PAGE评估蛋白二级/三级结构破坏程度。
5. 翻译后修饰检测：磷酸化、泛素化等修饰对蛋白降解的影响。

检测仪器

1. 高效液相色谱仪（HPLC/UPLC）：分离并定量降解产物。
2. 质谱仪（MALDI-TOF、ESI-Q-TOF）：精确测定降解产物的分子量及序列。
3. 分光光度计/荧光酶标仪：用于酶活性测定及总蛋白定量。
4. 圆二色谱仪：分析蛋白构象变化。
5. 电泳系统（SDS-PAGE、Western blot）：检测蛋白片段化及修饰状态。
6. 差示扫描量热仪（DSC）：评估蛋白热稳定性。

检测方法

1. 样本制备：
   • 提取蛋白后，用缓冲液（如PBS或RIPA）溶解，离心去除杂质。
   • 定量后分装，保存于-80℃避免降解。
2. 总蛋白测定：
   • BCA法：在562 nm波长下检测Cu²⁺还原产物的吸光度。
3. 降解产物分析：
   • HPLC-MS联用：C18色谱柱分离多肽，质谱鉴定碎片离子。
4. 酶活性测定：
   • 荧光底物法：如使用Z-LLE-AMC检测蛋白酶体活性，激发/发射波长380/460 nm。
5. 结构分析：
   • 圆二色谱：扫描190-250 nm波长范围，分析α-螺旋/β-折叠比例变化。
6. 翻译后修饰检测：
   • Western blot：使用泛素化/磷酸化抗体标记目标蛋白。
7. 热稳定性测试：
   • DSC法：以1℃/min升温速率扫描，记录蛋白变性吸热峰。

（注：实验需在4℃或冰上操作以避免非特异性降解，必要时添加蛋白酶抑制剂。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。