培养基支原体检测

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培养基支原体检测范围 培养基支原体检测主要应用于生物制药、细胞治疗、疫苗生产、科研用细胞系以及临床细胞培养等领域。其核心目标是确保细胞培养体系无支原体污染，保障实验结果的可靠性及生物制品的安全性。检测对象包括细胞培养液、冻存细胞样本、生物反应器培养物及生产用原材料（如胎牛血清、胰酶等）。

培养基支原体检测项目

1. 支原体污染定性检测：确认样本中是否含有支原体。
2. 支原体种属鉴定：通过分子生物学方法（如测序）明确污染支原体的具体种类。
3. 定量分析（可选）：评估污染程度，适用于高灵敏度检测需求。

培养基支原体检测仪器

1. PCR仪：用于支原体核酸的扩增与检测。
2. 荧光显微镜：观察DNA荧光染色结果。
3. 离心机：样本预处理及浓缩支原体颗粒。
4. 恒温培养箱：支持培养法检测（温度通常设定为37℃±1℃）。
5. 生物安全柜：确保无菌操作环境，避免交叉污染。

培养基支原体检测方法

1. 培养法

   • 将待测样本接种于支原体专用培养基（如Hayflick培养基），在需氧和厌氧条件下分别培养。
   • 观察28天，若培养基出现浑浊或pH变化（酚红指示剂显色），提示支原体生长。

2. PCR检测法

   • 提取样本DNA，采用支原体特异性引物（如靶向16S rRNA基因）进行扩增。
   • 通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR分析扩增产物，确认支原体核酸存在。

3. DNA荧光染色法

   • 将样本接种于指示细胞（如Vero细胞）培养48-72小时。
   • 固定细胞后，使用Hoechst 33258染料染色，荧光显微镜下观察细胞周围是否出现典型支原体颗粒（蓝色荧光斑点）。

4. 结果判读

   • 培养法与PCR法结合可提高检测灵敏度（检测限达1-10 CFU/mL）。
   • 阳性样本需复检确认，并进一步鉴定支原体种类。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。