细胞污染支原体检测

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检测范围

支原体污染的检测范围涵盖实验室及生物制品生产中的各类样本，主要包括：

1. 细胞培养物：如贴壁细胞、悬浮细胞、原代细胞及细胞株等。
2. 生物制品：疫苗、抗体、重组蛋白等生产过程中涉及的细胞基质或中间产物。
3. 培养基与试剂：血清、胰酶、细胞培养液等直接接触细胞的成分。
4. 实验室环境：工作台面、培养箱、生物反应器等潜在污染源。

检测项目

支原体检测的核心项目包括：

1. 支原体种类鉴定：如肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae）、口腔支原体（Mycoplasma orale）等常见污染菌。
2. 核酸水平检测：针对支原体特异性DNA序列（如16S rRNA基因）的定性或定量分析。
3. 活性检测：区分支原体的存活状态（活菌/死菌）。
4. 污染源追踪：通过基因分型或代谢特征确定污染途径。

检测仪器

1. PCR仪：用于核酸扩增，检测支原体DNA（常规PCR或实时荧光定量PCR）。
2. 荧光显微镜：观察支原体荧光染色结果（如Hoechst 33258染色）。
3. 酶标仪：用于酶联免疫吸附试验（ELISA）或比色法检测支原体代谢产物。
4. 微生物培养系统：如厌氧培养箱，支持支原体的选择性增殖。
5. 流式细胞仪：快速分析支原体感染的细胞比例。

检测方法

1. 培养法

   • 原理：利用支原体选择性培养基（如SP4培养基）进行增殖，通过观察菌落或代谢变化（如pH指示剂变色）判断污染。
   • 步骤：样本接种→厌氧培养21-28天→菌落形态或生化反应确认。

2. PCR法

   • 原理：扩增支原体保守基因序列（如16S rRNA），通过电泳或荧光信号判断结果。
   • 步骤：DNA提取→引物设计（通用或特异性引物）→扩增→产物分析。

3. 荧光染色法

   • 原理：使用DNA结合荧光染料（如Hoechst 33258）染色，通过显微镜观察细胞周围微小颗粒（支原体DNA）。
   • 步骤：细胞固定→染色→荧光显微镜观察。

4. ELISA法

   • 原理：检测支原体特异性抗原或宿主抗体反应。
   • 步骤：包被抗原→样本孵育→酶标二抗显色→吸光度测定。

5. DNA荧光染色法（指示细胞法）

   • 原理：将待测样本与指示细胞（如Vero细胞）共培养，染色后观察支原体对宿主细胞的感染。
   • 步骤：样本接种指示细胞→培养3-5天→荧光染色→显微镜分析。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。