高糖动物模型检测

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高糖动物模型检测内容

1. 检测范围 本研究采用链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠模型（C57BL/6品系）及高脂高糖饮食诱导的肥胖型糖尿病大鼠模型（SD品系）。检测覆盖建模后第4周至第12周的动态变化，包括血糖稳态、代谢紊乱、氧化应激及器官损伤等指标。实验组分为正常对照组、模型组及干预组（每组n=10），所有动物于标准化SPF环境中饲养。

2. 检测项目 （1）血糖相关指标：空腹血糖（FBG）、餐后2小时血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。 （2）代谢产物：血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、游离脂肪酸（FFA）及肝脏糖原含量。 （3）氧化应激指标：血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及总抗氧化能力（T-AOC）。 （4）炎症因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）及C反应蛋白（CRP）。 （5）器官功能评估：胰腺组织病理学（HE染色观察胰岛结构）、肾脏功能（血肌酐、尿素氮）及肝脏功能（ALT、AST活性）。

3. 检测仪器 （1）血糖检测：便携式血糖仪（OneTouch Ultra2，美国强生）及全自动生化分析仪（Hitachi 7080，日本）。 （2）胰岛素与炎症因子：酶标仪（BioTek Synergy H1，美国）配合ELISA试剂盒（R&D Systems）。 （3）HbA1c检测：高效液相色谱仪（HPLC，Agilent 1260，美国）。 （4）氧化应激指标：紫外分光光度计（Shimadzu UV-1800，日本）及化学发光分析仪（Berthold Centro LB 960，德国）。 （5）组织病理学：光学显微镜（Nikon Eclipse Ni-U，日本）及图像分析系统（Image-Pro Plus 6.0）。 （6）基因与蛋白表达：实时荧光定量PCR仪（Applied Biosystems 7500，美国）及Western blot电泳系统（Bio-Rad）。

4. 检测方法 （1）血糖与代谢产物：

• 空腹血糖：禁食12小时后尾静脉采血，血糖仪直接测定；血清胰岛素通过ELISA法检测，HOMA-IR计算公式为（FBG×空腹胰岛素）/22.5。
• 血脂与肝功能：全自动生化分析仪采用比色法，试剂盒为南京建成生物工程研究所提供。

（2）氧化应激与炎症因子：

• MDA采用硫代巴比妥酸（TBA）法，SOD活性通过黄嘌呤氧化酶法测定；炎症因子使用ELISA试剂盒，严格按说明书操作。

（3）组织病理学：

• 胰腺、肝脏及肾脏组织经4%多聚甲醛固定、石蜡包埋后切片（厚度4 μm），HE染色观察结构，胰岛面积通过Image-Pro Plus量化分析。

（4）分子生物学检测：

• 实时定量PCR：TRIzol法提取组织RNA，逆转录为cDNA后扩增目标基因（如GLUT4、NF-κB），以β-actin为内参。
• Western blot：组织匀浆后提取总蛋白，SDS-PAGE电泳分离，转膜后孵育一抗（如IRS-1、p-AKT），化学发光法显影。

（5）数据处理：所有数据采用SPSS 26.0分析，组间差异以单因素方差分析（ANOVA）及T检验评估，P<0.05为显著性阈值。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。