病毒感染小鼠模型检测

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病毒感染小鼠模型检测方案

1. 检测范围 本检测方案适用于通过鼻腔滴注、腹腔注射或颅内接种等途径建立的病毒感染小鼠模型，覆盖以下范围：

• 病毒类型：包括流感病毒（如H1N1）、冠状病毒（如SARS-CoV-2）、疱疹病毒（如HSV-1）等RNA/DNA病毒。
• 小鼠品系：C57BL/6、BALB/c或免疫缺陷鼠（如NSG小鼠）。
• 感染时间点：急性期（感染后1-7天）、亚急性期（8-14天）及慢性期（>14天）。
• 样本类型：血清、肺/肝/脑组织匀浆、支气管肺泡灌洗液（BALF）及粪便等。

2. 检测项目 根据实验目的，检测项目分为以下四类：

• 病毒载量检测：通过qRT-PCR定量病毒核酸、噬斑形成试验（Plaque Assay）测定感染性病毒颗粒、免疫荧光染色定位病毒抗原。
• 免疫指标检测：包括ELISA检测血清细胞因子（IL-6、TNF-α、IFN-γ）、流式细胞术分析T细胞亚群（CD4+/CD8+）、中性粒细胞及巨噬细胞浸润水平。
• 病理学分析：苏木精-伊红（H&E）染色观察组织炎症及坏死程度，Masson染色评估肺纤维化（如适用）。
• 血液生化指标：全自动生化分析仪检测ALT、AST、CRP等炎症及器官损伤标志物。
• 临床症状评分：记录体重下降率、活动量、毛发状态及生存率。

3. 检测仪器

• 病毒载量检测：实时荧光定量PCR仪（Thermo Fisher QuantStudio 5）、超速离心机（Beckman Coulter Optima XE）、荧光显微镜（Olympus BX53）。
• 免疫及生化分析：酶标仪（BioTek Synergy H1）、流式细胞仪（BD FACSCanto II）、全自动生化分析仪（Roche Cobas c501）。
• 病理学检测：组织切片机（Leica RM2235）、冰冻切片机（Thermo Cryotome FSE）、显微成像系统（Nikon Eclipse Ci-L）。

4. 检测方法 4.1 病毒载量检测

• qRT-PCR：取100 mg感染组织，通过TRIzol法提取总RNA，使用病毒特异性引物（如SARS-CoV-2的N基因引物）进行扩增，以GAPDH为内参，通过2^(-ΔΔCt)法计算病毒拷贝数。
• 噬斑形成试验：将组织匀浆上清接种于Vero E6单层细胞，覆盖1%甲基纤维素，48 h后结晶紫染色，计数噬斑数（PFU/mL）。

4.2 免疫指标检测

• ELISA：将小鼠血清按1:100稀释，包被病毒特异性抗体（如抗流感NP蛋白单抗），加入HRP标记二抗，TMB显色后测定450 nm吸光度，通过标准曲线计算浓度。
• 流式细胞术：取脾脏淋巴细胞，经Fc阻断后，标记CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC抗体，上机分析T细胞比例。

4.3 病理学分析

• H&E染色：取肺组织固定于4%多聚甲醛，石蜡包埋后切片（4 μm厚度），依次进行苏木精染色5 min、伊红染色2 min，封片后观察炎症细胞浸润及肺泡结构破坏情况。

4.4 血液生化检测

• 采集小鼠眼眶静脉血，3000 rpm离心10 min分离血清，使用 Roche Cobas c501 检测ALT（速率法）、AST（酶联法）及CRP（免疫比浊法）。

4.5 临床症状评分

• 每日记录体重变化（下降>20%为终点标准）、活动状态（0-4分量表：0=正常，4=濒死），计算累积生存率（Kaplan-Meier曲线）。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。