移植小鼠模型检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

移植小鼠模型检测技术规范

一、检测范围 本检测适用于同种异体移植（如皮肤、心脏、肾脏）及异种移植（如人源肿瘤细胞系）的小鼠模型，涵盖移植后生存率、移植物存活状态、宿主免疫反应及分子机制研究。检测时间点包括术后早期（24-72小时）、中期（7-14天）及长期（28天以上）的动态观察。

二、检测项目

1. 组织学分析：移植物病理学评估（炎症、坏死、纤维化）。
2. 免疫反应检测：宿主T细胞、B细胞、巨噬细胞浸润水平；血清细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）浓度。
3. 功能评估：移植物血流灌注（心脏/肾脏）、代谢活性（肿瘤模型）、运动功能（神经移植）。
4. 分子检测：移植区域基因表达谱（qRT-PCR）、蛋白磷酸化状态（Western blot）。
5. 影像学检查：活体成像监测移植物体积变化或荧光标记细胞迁移。

三、检测仪器

1. 组织学设备：石蜡切片机（Leica RM2235）、全自动染色机（Thermo Scientific ST5020）、光学显微镜（Nikon Eclipse Ci-L）。
2. 免疫分析仪器：流式细胞仪（BD FACSCelesta）、酶标仪（BioTek Synergy H1）。
3. 功能监测设备：激光散斑血流成像系统（PeriCam PSI）、代谢笼（TSE Systems）。
4. 分子检测平台：实时荧光定量PCR仪（ABI QuantStudio 5）、蛋白电泳系统（Bio-Rad Mini-PROTEAN）。
5. 影像学设备：小动物MRI（Bruker BioSpec 7T）、活体成像系统（PerkinElmer IVIS Spectrum）。

四、检测方法

1. 样本处理

   • 移植物及宿主脾脏/淋巴结采集后，4%多聚甲醛固定24小时，石蜡包埋或冷冻切片（-80℃保存）。
   • 血液样本经3,000 rpm离心10分钟分离血清，-20℃保存备用。

2. 组织学分析

   • H&E染色：切片脱蜡后苏木精染色5分钟，伊红复染1分钟，中性树胶封片，显微镜下评估炎症评分（0-4级）。
   • 免疫组化：抗原修复（pH6.0柠檬酸钠缓冲液，95℃ 20分钟），一抗（CD3/CD68，1:200稀释）孵育过夜，DAB显色定量分析阳性细胞占比。

3. 免疫反应检测

   • 流式细胞术：脾细胞悬液经Ficoll密度梯度离心获取单核细胞，抗CD4-FITC/CD8-PE抗体标记，上机检测T细胞亚群比例。
   • ELISA：血清按1:10稀释，加入预包被IL-2抗体板，37℃孵育1小时，TMB显色后450 nm测定吸光度。

4. 分子检测

   • qRT-PCR：TRIzol法提取RNA，逆转录为cDNA，SYBR Green法扩增目标基因（GAPDH内参），2^−ΔΔCt法计算相对表达量。
   • Western blot：组织裂解液RIPA提取总蛋白，SDS-PAGE电泳后转膜，5%脱脂牛奶封闭，一抗（p-AKT, 1:1,000）4℃孵育12小时，ECL化学发光显影。

5. 影像学检查

   • 活体MRI：异氟烷麻醉小鼠，T2加权序列扫描（TR=2,500 ms, TE=33 ms），三维重建分析移植物体积。
   • 荧光成像：Luciferin底物（150 mg/kg）腹腔注射，IVIS系统采集生物发光信号（曝光时间60秒），Living Image软件定量光子通量。

（注：所有实验均遵循动物伦理审查要求，检测参数需根据具体模型优化。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。